ДНҚ-ны бояу үшін қолданылатын Hoechst бояғыштары туралы ақпарат. Hoechst 33342, 33258, 34580 түрлері, спектрлері, қолданылуы. ДНҚ зерттеулеріне арналған.
Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Кіріспе
ДНК-ны бояуға қолданылатын флуоресцентті бояғыш.
Fluorescent dye used to stain DNA
Хойхст бояуы – ДНК-ны бояуға қолданылатын көк флуоресцентті бояулар отбасының бір бөлігі. Бұл бисбензимидтерді бастапқыда Hoechst AG компаниясы әзірлеген, және компания жасаған барлық қосылыстарды нөмірлегендіктен, Хойхст 33342 бояуы компанияның 33 342-ші туындысы болып табылады. Үш ұқсас Хойхст бояуы бар: Хойхст 33258, Хойхст 33342 және Хойхст 34580. Хойхст 33258 және Хойхст 33342 бояулары ең көп қолданылады, олардың қоздыру-эмиссия спектрлері ұқсас.
Hoechst stains are part of a family of blue fluorescent dyes used to stain DNA. These bis benzimides were originally developed by Hoechst AG, which numbered all their compounds so that the dye Hoechst 33342 is the 33,342nd compound made by the company. There are three related Hoechst stains: Hoechst 33258, Hoechst 33342, and Hoechst 34580. The dyes Hoechst 33258 and Hoechst 33342 are the ones most commonly used and they have similar excitation–emission spectra.
Молекулалық сипаттамалары
Екі бояу да шамамен 350 нм толқын ұзындығындағы ультракөк сәулемен қоздырылады, және екеуі де 461 нм-дегі максималды эмиссиялық спектр маңында көк-цианотүсті флуоресценттік жарық шығарады. Байланбаған бояудың максималды флуоресценциялық эмиссиясы 510–540 нм диапазонында байқалады. Hoechst бояуларын ксенон немесе сынап доғалы лампалармен немесе ультракөк лазермен қоздыруға болады. Қоздыру және эмиссия спектрлері арасындағы айқын Стокс қағидасы, көптеген флуорофорлар қолданылатын тәжірибелерде Hoechst бояуларын пайдалы етеді. Hoechst бояуларының флуоресценция интенсивтігі де еріткіштің pH деңгейімен бірге артады. Hoechst бояулары суда және диметилформамид немесе диметилсульфоксид сияқты органикалық еріткіштерде ерігіш. 10 мг/мл дейін концентрацияға қол жеткізуге болады. Сулы ерітінділер жарықтан қорғалғанда кем дегенде алты ай бойы 2–6 °C температурада тұрақты болады. Ұзақ мерзімді сақтау үшін ерітінділер -20 °C немесе одан төмен температурада қатырылады. Hoechst бояулары жасушаларға өтімді және тірі немесе бекітілген жасушалардағы ДНК-ға байланыса алады. Сондықтан бұл бояулар көбінесе тірі жасушалардың осы қосылыстармен емдеуден зардап көрмей қалуын білдіретін "суправитальды" деп аталады. ATP байланыстырушы кассеттік тасымалдаушы ақуыздарын экспрессиялайтын жасушалар осы бояуларды өз цитоплазмасынан белсенді түрде шығара алады.
Both dyes are excited by ultraviolet light at around 350 nm, and both emit blue cyan fluorescent light around an emission spectrum maximum at 461 nm. Unbound dye has its maximum fluorescence emission in the 510–540 nm range. Hoechst stains can be excited with a xenon or mercury arc lamp or with an ultraviolet laser. There is a considerable Stokes shift between the excitation and emission spectra that makes Hoechst dyes useful in experiments in which multiple fluorophores are used. The fluorescence intensity of Hoechst dyes also increases with the pH of the solvent. Hoechst dyes are soluble in water and in organic solvents such as dimethyl formamide or dimethyl sulfoxide. Concentrations can be achieved of up to 10 mg/mL. Aqueous solutions are stable at 2–6 °C for at least six months when protected from light. For longterm storage the solutions are instead frozen at −20 °C or below. Hoechst dyes are cell permeable and can bind to DNA in live or fixed cells. Thus, these stains are often called supravital, meaning that live cells survive a treatment with these compounds. Cells that express specific ATP binding cassette transporter proteins can also actively transport these stains out of their cytoplasm.