Флуоресцентные красители Hoechst для окрашивания ДНК
Hoechst stain
Флуоресцентные красители Hoechst 33258, 33342 и 34580 для окрашивания ДНК. Свойства, спектры возбуждения/излучения, применение в биологии и исследованиях.
Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.
Введение
Флуоресцентные красители, используемые для окрашивания ДНК, относятся к семейству синих флуоресцентных красителей, применяемых для окрашивания ДНК. Эти бисбензимиды были первоначально разработаны компанией Hoechst AG, которая присваивала порядковые номера всем своим соединениям, поэтому краситель Hoechst 33342 является 33 342-м соединением, синтезированным компанией. Существует три родственных красителя Hoechst: Hoechst 33258, Hoechst 33342 и Hoechst 34580. Красители Hoechst 33258 и Hoechst 33342 используются наиболее часто и обладают схожими спектрами возбуждения и эмиссии.
Fluorescent dye used to stain DNA
Hoechst stains are part of a family of blue fluorescent dyes used to stain DNA. These bis benzimides were originally developed by Hoechst AG, which numbered all their compounds so that the dye Hoechst 33342 is the 33,342nd compound made by the company. There are three related Hoechst stains: Hoechst 33258, Hoechst 33342, and Hoechst 34580. The dyes Hoechst 33258 and Hoechst 33342 are the ones most commonly used and they have similar excitation–emission spectra.
Молекулярные характеристики
Оба красителя возбуждаются ультрафиолетовым светом около 350 нм и оба излучают сине-циановый флуоресцентный свет с максимумом спектра излучения около 461 нм. Максимальная флуоресцентная эмиссия несвязанного красителя находится в диапазоне 510–540 нм. Красители Hoechst могут возбуждаться ксеноновой или ртутной дуговой лампой, либо ультрафиолетовым лазером. Наблюдается значительное смещение Стокса между спектрами возбуждения и излучения, что делает красители Hoechst полезными в экспериментах с использованием нескольких флюорофоров. Интенсивность флуоресценции красителей Hoechst также возрастает с повышением pH растворителя. Красители Hoechst растворимы в воде и органических растворителях, таких как диметилформамид или диметилсульфоксид. Достижимые концентрации – до 10 мг/мл. Водные растворы стабильны при 2–6 °C в течение не менее шести месяцев при защите от света. Для длительного хранения растворы следует замораживать при температуре −20 °C или ниже. Красители Hoechst проникают в клетки и могут связываться с ДНК в живых или фиксированных клетках. Поэтому эти красители часто называют суправітальними, то есть живые клетки выживают после обработки этими соединениями. Клетки, экспрессирующие специфические АТФ-связывающие кассетные транспортерные белки, также могут активно выводить эти красители из цитоплазмы.
Both dyes are excited by ultraviolet light at around 350 nm, and both emit blue cyan fluorescent light around an emission spectrum maximum at 461 nm. Unbound dye has its maximum fluorescence emission in the 510–540 nm range. Hoechst stains can be excited with a xenon or mercury arc lamp or with an ultraviolet laser. There is a considerable Stokes shift between the excitation and emission spectra that makes Hoechst dyes useful in experiments in which multiple fluorophores are used. The fluorescence intensity of Hoechst dyes also increases with the pH of the solvent. Hoechst dyes are soluble in water and in organic solvents such as dimethyl formamide or dimethyl sulfoxide. Concentrations can be achieved of up to 10 mg/mL. Aqueous solutions are stable at 2–6 °C for at least six months when protected from light. For longterm storage the solutions are instead frozen at −20 °C or below. Hoechst dyes are cell permeable and can bind to DNA in live or fixed cells. Thus, these stains are often called supravital, meaning that live cells survive a treatment with these compounds. Cells that express specific ATP binding cassette transporter proteins can also actively transport these stains out of their cytoplasm.