Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
Ірі қара малдың ұрығынан алынған қаннан туындаған
Derived from the blood of a bovine fetus
Ірі қара малдың ұрықтық сарысуы (FBS) мал сою зауытында жабық жүйе арқылы ірі қара малдың ұрығынан алынған қаннан дайындалады. Ірі қара малдың ұрықтық сарысуы – эукариоттық жасушаларды in vitro жасуша өсіру үшін ең көп қолданылатын сарысу қоспасы. Бұл оның антиденелердің өте төмен деңгейде болуымен және көптеген өсу факторларын қамтитынымен байланысты, бұл көптеген жасуша мәдениеттерінде әмбебап қолдануға мүмкіндік береді. Глобулярлы ақуыз, ірі қара сарысуы альбумині (BSA) – ұрықтық ірі қара сарысуының маңызды құрамдас бөлігі. Ірі қара малдың ұрықтық сарысуындағы ақуыздардың көптеген түрлері өсірілген жасушаларды тірі қалуға, өсуге және бөлінуге қабілетті ортада ұстап тұрады. Биологиялық өнім болғандықтан, FBS толық анықталмаған орта компоненті болып табылады және осы себепті әр партияның құрамы әртүрлі болуы мүмкін. Осыған байланысты және кездейсоқ факторлардың таралу мүмкіндігін азайту үшін сарысусыз және химиялық түрде анықталған орталар (ХҚО) әзірленді. Дегенмен, сарысусыз ортаның тиімділігі шектеулі, өйткені көптеген жасуша штамдары өсу үшін сарысуды қажет етеді, ал көптеген сарысусыз орта құралымдары тек белгілі бір жасуша түрлерінің өсуін ғана қолдай алады.
Fetal bovine serum (FBS) is derived from the blood drawn from a bovine fetus via a closed system of collection at the slaughterhouse. Fetal bovine serum is the most widely used serum supplement for the in vitro cell culture of eukaryotic cells. This is due to it having a very low level of antibodies and containing more growth factors, allowing for versatility in many different cell culture applications. The globular protein, bovine serum albumin (BSA), is a major component of fetal bovine serum. The rich variety of proteins in fetal bovine serum maintains cultured cells in a medium in which they can survive, grow, and divide. Because it is a biological product, FBS is not a fully defined media component, and as such varies in composition between batches. As a result of this and in an attempt to minimize the possibility of transfer of adventitious agents, serum free and chemically defined media (CDM) have been developed. However, the effectiveness of serum free media is limited as many cell lines still require serum in order to grow, and many serum free media formulations can only support the growth of narrowly defined types of cells.
Өндіріс
FBS ет өндірісінің жанама өнімі болып табылады. FBS, жасуша өсіруде қолданылатын жануар сарысуының көп бөлігі сияқты, коммерциялық қасапханаларда жиналған сиырдың қанынан жасалады, бұл сиырлар адамдарға арналған етпен де қамтамасыз етеді. FBS өндірісінің бірінші кезеңі – сойылған сиырдан алынғаннан кейін сиыр ұрығынан қан алу. Ұрық оттегінің жетіспеуінен өледі, себебі сиыр өлгеннен кейін кемінде 15-20 минут бойы аналық жатырдың қорғаныш ортасында қалады. Қан стерильді ыдысқа немесе қан қапшығына асептикалық жағдайда жиналады, содан кейін ұюына рұқсат етіледі. Қан алудың қалыпты әдісі – жүрек пункциясы. Бұл ұрықтың өзінен және қоршаған ортадан микроорганизмдермен сарысудың ластану қаупін азайтады, сонымен қатар жиналған қанның көлемін арттырады. Содан кейін фибрин ұйымдарын және қалған қан жасушаларын мөлдір сары (саламы) түсті сарысудан бөлу үшін центрифугаланады. Жасуша мәдениетіне жарамды болу үшін қажетті қосымша өңдеуден бұрын сарысу мұздатылады. Өңдеудің екінші кезеңі сүзгілеуді қамтиды, әдетте сүзгілеу тізбегі қолданылады, соңғы сүзгілеу үш стерильді 0,1 микронды мембраналық сүзгіден тұрады. Асептикалық жағдайда өңделген FBS қатаң сапа бақылау сынақтарынан өтеді және толық талдау сертификатымен бірге жеткізіледі. Сертификатта сынақ нәтижелерінің толық тізімі және сарысудың тегі туралы ақпарат берілген. Тәуелсіз сатушылар ұсынатын талдау сертификаттары әртүрлі болуы мүмкін, бірақ олардың әрқайсысында әдетте мыналар туралы мәліметтер болады: сүзгілеу туралы мәлімдеме, қан жиналған ел, өндірілген ел, жасуша өсуіне қабілеттілікті тексеру, микробтық стерильділікті тексеру, сондай-ақ микоплазма мен вирус, эндотоксин, гемоглобин, IgG гамма-глутамилтрансфераза және жалпы белок мөлшерін анықтау. FBS жиналған елге қатысты да тексеруге болады.
FBS is a by product of the meat industry. FBS, as with the vast majority of animal serum used in cell culture, is produced from blood collected at commercial slaughterhouses from cattle that also supply meat intended for human consumption. The first stage of the production process for FBS is the harvesting of blood from the bovine fetus after the fetus is removed from the slaughtered cow. The fetus dies from the lack of oxygen by remaining in the protective environment of the uterus for a minimum of 15–20 minutes after the cow is dead. The blood is collected aseptically into a sterile container or blood bag and then allowed to clot. The normal method of collection is cardiac puncture. This minimizes the danger of serum contamination with micro organisms from the fetus itself, and the environment, while maximizing the volume of blood collected. It is then centrifuged to remove the fibrin clot and the remaining blood cells from the clear yellow (straw) colored serum. The serum is frozen prior to further processing that is necessary to make it suitable for cell culture. The second stage of processing involves filtration, typically using a filtration chain with the final filtration being three sterile 0.1 micron membrane filters. The aseptically processed FBS is subjected to stringent quality control testing and is supplied with a detailed Certificate of Analysis. The certificate gives full test results and information concerning the origin of the serum. Certificates of Analysis vary between commercial suppliers, but each usually includes the following details: filtration statement, country of blood collection, country of manufacture, cell growth performance testing, microbial sterility testing, as well as screening for mycoplasma and virus, endotoxin, hemoglobin, IgG gamma glutamyl transferase and total protein assays. FBS may also be tested for country of collection.
Этика
Қан жинау процесіне қатысты этикалық мәселелер туындады, себебі бұл ұрыққа мүмкін болатын ауырсынуға байланысты. Ірі қара малдың ұрық сарысуын жинау әдістемелері талқыланды. Халықаралық сарысу индустриясы қауымдастығы (ISIA) сарысудың этикалық түрде жиналуын қамтамасыз ету үшін қолданылатын қатаң ережелер мен процедуралар туралы толық ақпарат жариялады. Анасы сойылған кезде және сою процесінде уақыт өте келе ұрық есінен айрылып немесе өледі, бірақ туылмаған тірі бұзаулардың оттегіге ұшырауы оларды өлтіру алдында есіне келтіруі мүмкін деген болжам бар, бұл сарысуды жинаудың этикалық жағына қатысты пікірталастарды қозғады. Индустрия қауымдастығы кейбір ұйымдардың алаңдаушылығын мойындайды, бірақ барлық сарысу жинау шаралары жинаушы елдің тиісті органы бақылайтын, тіркелген сою орындарында ветеринарлық бақылауда жүргізіледі деп мәлімдейді.
Ethical questions have been raised regarding the blood collection process due to the potential suffering caused to the fetus. There has been discussion concerning the methodologies for the collection of fetal bovine serum. The International Serum Industry Association (ISIA) has published literature providing detail on the extensive regulation and processes employed to ensure that serum is collected in an ethical manner. Although the act of slaughter of the dam and the time which passes in the slaughter process prior to harvesting will induce unconsciousness or death of the fetus prior to serum harvesting, it has been postulated that exposure of live unborn calves to oxygen could cause them to gain awareness before being killed, resulting in active debate about the ethics of harvesting serum. While the Industry Association accepts that certain organizations have concerns, they maintain that all collections of serum take place under veterinary supervision in registered slaughterhouses controlled by the competent authority in the country of collection.
Серумды қолдану
Көптеген өндірушілерден ірі қара малдың ұрықтық сарысуы қолжетімді, ал in vitro жағдайында өсірілген жасушалар өте сезімтал болғандықтан, клиенттер әдетте нақты партияларды өздерінің нақты жасуша түріне сәйкес келе ма екенін тексеру үшін сынап көреді. Бір партиядан екінші партияға ауысқанда, жасушаларды жаңа материалға бейімдеу қалыпты жағдай, мысалы, ескі сарысудың 50%-ын жаңа сарысудың 50%-ымен араластырып, жасушалардың жаңа материалға бейімделуіне мүмкіндік беру арқылы. Өсу факторлары сияқты компоненттердің тұрақтылығын сақтау үшін сарысуды мұздатып сақтау керек. Сарысуды еріткен кезде кейбір шөкпелер пайда болуы мүмкін. Бұл қалыпты құбылыс және сарысудың сапасына ешқандай зиян келтірмейді. Шөкпені стерильді құтыларға ауыстырып, 5 минут бойы 400 × g күшпен центрифугалау арқылы жоюға болады. Шөкпенің мөлшерін азайту үшін сарысуды 2-8°C температурада тоңазытқышта еріту ұсынылады. Бұл процесте сарысуды үнемі араластырып отыру қажет. Сарысуды қайта-қайта мұздату/ерітуден аулақ болу керек, және мұздату алдында сарысуды бір рет қолданылатын бөліктерге (аликвоталарға) бөлуге кеңес беріледі.
Fetal bovine serum is commercially available from many manufacturers, and because cells grown in vitro are highly sensitive, customers usually test specific batches to check for suitability for their specific cell type. When changing from batch to batch it is usual to adapt the cells to the new batch of material, for example, by mixing 50% of the old serum with 50% of the new serum and allowing the cells to acclimatize to the new material. Serum is stored frozen to preserve the stability of components such as growth factors. When serum is thawed, some precipitation may be seen. This is a normal phenomenon, and it does not compromise the quality of serum in any way. The precipitate may be removed by transferring the serum to sterile tubes and centrifuging for 5 minutes at 400 × g. To limit the amount of precipitation, it is recommended that the serum is thawed in a refrigerator at 2 8˚C. The serum should be regularly stirred during this process. Repeated freeze/thaw cycles should be avoided, and it is advisable to dispense the serum into single use aliquots before freezing.
Бастапқы дереккөздер
Биотехнология индустриясы мен ғылыми-зерттеу салаларында қолдануға арналған сарысу қатаң түрде реттеледі. Жануарлардан алынған барлық өнімдерді жинау және әлемдік қозғалысы қатаң бақылауда болады. Жануарлардан алынған өнімдерге ветеринариялық бақылау көбінесе ЕО (DG SANCO) және АҚШ (USDA) белгілеген ережелерге сәйкес жүзеге асырылады. ЕО-ға жануарлардан алынған қосалқы өнімдерді импорттауды реттейтін қазіргі регламент (ЕО) 1069/2009 және оны іске асыру құжаты (ЕО) 142/2011 болып табылады. FBS – бүкіл әлемде жиналатын өнім, оның негізгі жинау орындары АҚШ, Австралия, Жаңа Зеландия, Канада, Орталық Америка, Оңтүстік Америка және Еуропада шоғырланған.
Serum produced for use in the biotechnology industry and research sectors is highly regulated. The collection and movement of all animal derived products globally is strictly controlled. Veterinary control of animal derived products largely follows the regulations set by the EU (DG SANCO) and the US (USDA). The current regulation governing the importation of animal by products into the EU is covered by Regulation (EU) 1069/2009 and the implementation document Regulation (EU) 142/2011. FBS is a product collected worldwide with the main collections being centered in the United States, Australia, New Zealand, Canada, Central America, South America, and Europe.
Дүниежүзілік сатылым
2008 жылы FBS сатылымы әлем бойынша 700 000 литрге бағаланды. 2012 жылғы дереккөз бойынша, жылына шамамен 600 000 литр өндіріледі, оның үштен бірі Жақсы өндіріс практикасы бойынша фармацевтикалық қолдануға жарамды. Бір литр сарысу алу үшін 1-3 ұрық қажет.
Sales of FBS in 2008 were estimated to be 700,000 liters globally. A 2012 source estimates that about 600,000 liters are made annually, one third of which is suitable for pharmaceutical use under Good Manufacturing Practice. 1 to 3 fetuses are required to produce one liter of serum.