Введение
Получена из крови плода крупного рогатого скота.
Фетальная сыворотка крупного рогатого скота (FBS) получается из крови, полученной от плода крупного рогатого скота посредством замкнутой системы сбора на скотобойне. Фетальная сыворотка крупного рогатого скота является наиболее широко используемой сывороточной добавкой для культивирования эукариотических клеток in vitro. Это обусловлено очень низким содержанием антител и высоким содержанием факторов роста, что обеспечивает универсальность в различных приложениях клеточных культур. Глобулярный белок, альбумин сыворотки крупного рогатого скота (BSA), является основным компонентом фетальной сыворотки. Богатое разнообразие белков в фетальной сыворотке поддерживает культивируемые клетки в среде, необходимой для их выживания, роста и деления. Поскольку FBS является биологическим продуктом, это не полностью определенный компонент среды, и, следовательно, его состав варьируется от партии к партии. В связи с этим и для минимизации риска передачи посторонних агентов были разработаны среды, не содержащие сыворотки, и химически определенные среды (CDM). Однако эффективность сред, свободных от сыворотки, ограничена, поскольку многие клеточные линии по-прежнему нуждаются в сыворотке для роста, а многие составы сред, свободных от сыворотки, могут поддерживать рост только узкоспециализированных типов клеток.
Производство
FBS является побочным продуктом мясной промышленности. FBS, как и подавляющее большинство животной сыворотки, используемой в клеточных культурах, производится из крови, собранной на коммерческих скотобойнях от крупного рогатого скота, который также поставляет мясо для потребления человеком. Первый этап производства FBS – сбор крови из плода крупного рогатого скота после извлечения плода из убойного тела коровы. Плод погибает из-за недостатка кислорода, оставаясь в защитной среде матки в течение минимум 15–20 минут после смерти коровы. Кровь асептически собирается в стерильную емкость или мешок для крови, после чего ей дают свернуться. Обычно кровь собирают путем пункции сердца. Это минимизирует риск контаминации сыворотки микроорганизмами от самого плода и окружающей среды, одновременно максимизируя объем собранной крови. Затем ее центрифугируют для удаления фибринового сгустка и оставшихся клеток крови из прозрачной желтой (соломенного цвета) сыворотки. Сыворотка замораживается перед дальнейшей обработкой, необходимой для ее пригодности для клеточных культур. Вторая стадия обработки включает фильтрацию, как правило, с использованием цепочки фильтров, завершающей стадией которой является фильтрация через три стерильных мембранных фильтра размером 0,1 мкм. Асептически обработанный FBS подвергается строгому контролю качества и поставляется с подробным сертификатом анализа. В сертификате приводятся полные результаты тестов и информация о происхождении сыворотки. Сертификаты анализа могут различаться у разных коммерческих поставщиков, но обычно включают следующие данные: информацию о фильтрации, страну сбора крови, страну производства, тестирование эффективности роста клеток, тестирование на микробиологическую стерильность, а также скрининг на микоплазму и вирусы, эндотоксины, гемоглобин, IgG, гамма-глутамилтрансферазу и общий анализ белка. FBS также может быть проверен на страну сбора.
Этика
В связи с потенциальными страданиями, которые может испытывать плод, были подняты этические вопросы относительно процесса сбора крови. Обсуждались методики получения фетальной сыворотки крупного рогатого скота. Международная ассоциация сывороточной промышленности (ISIA) опубликовала материалы, подробно описывающие обширное регулирование и процедуры, применяемые для обеспечения этичного сбора сыворотки. Несмотря на то, что сам процесс забоя матери и время, прошедшее в процессе забоя до момента забора сыворотки, приводят к потере сознания или смерти плода до забора сыворотки, существует мнение, что воздействие кислорода на живых неродившихся телят может вызвать у них осознание перед убоем, что стало причиной активных дискуссий об этичности забора сыворотки. Хотя Ассоциация признает обеспокоенность некоторых организаций, она утверждает, что весь сбор сыворотки осуществляется под ветеринарным контролем на зарегистрированных бойнях, находящихся под контролем компетентного органа в стране сбора.
Использование сыворотки
Фетовая сыворотка крупного рогатого скота коммерчески доступна от многих производителей, и поскольку клетки, выращенные in vitro, обладают высокой чувствительностью, клиенты обычно тестируют конкретные партии для проверки их пригодности для конкретного типа клеток. При переходе с одной партии на другую обычно проводят адаптацию клеток к новой партии материала, например, смешивая 50% старой сыворотки с 50% новой сыворотки и давая клеткам акклиматизироваться к новому материалу. Сыворотка хранится замороженной для сохранения стабильности компонентов, таких как факторы роста. При размораживании сыворотки может наблюдаться образование осадка. Это нормальное явление и не влияет на качество сыворотки. Осадок можно удалить, перенеся сыворотку в стерильные пробирки и центрифугируя в течение 5 минут при 400 × g. Чтобы уменьшить количество осадка, рекомендуется размораживать сыворотку в холодильнике при температуре 2–8 °C. В процессе размораживания сыворотку следует регулярно перемешивать. Следует избегать повторных циклов замораживания-оттаивания, и рекомендуется распределять сыворотку на одноразовые аликвоты перед замораживанием.
История источников
Сыворотка, производимая для использования в биотехнологической промышленности и исследовательском секторе, подлежит строгому регулированию. Сбор и перемещение всех продуктов животного происхождения по всему миру строго контролируются. Ветеринарный контроль продуктов животного происхождения в основном осуществляется в соответствии с нормами, установленными ЕС (ГД SANCO) и США (USDA). Действующее регулирование, касающееся импорта побочных продуктов животного происхождения в ЕС, определяется Регламентом (ЕС) 1069/2009 и документом, определяющим порядок его применения, Регламентом (ЕС) 142/2011. FBS – это продукт, собираемый по всему миру, при этом основные места сбора расположены в Соединенных Штатах, Австралии, Новой Зеландии, Канаде, Центральной Америке, Южной Америке и Европе.
Мировая продажа
Продажи FBS в 2008 году оценивались в 700 000 литров по всему миру. По данным источника 2012 года, ежегодно производится около 600 000 литров, из которых примерно треть соответствует требованиям надлежащей производственной практики для использования в фармацевтике. Для производства одного литра сыворотки требуется от 1 до 3 плодов.