Кіріспе

Клеткадағы хромосомалық жиынтықтың фотосуретте көрсетілуі

Кариотип – бір түрдің немесе жеке организмнің жасушаларындағы хромосомалардың толық жиынтығының жалпы көрінісі, көбінесе олардың мөлшері, саны және пішінін қамтиды. Кариотиптеу – жеке организмнің хромосомалық жиынтығын, соның ішінде хромосомалардың санын және кез келген аномалияларды анықтау арқылы кариотипті анықтау процесі. Кариограмма немесе идиограмма – кариотиптің графикалық бейнесі, онда хромосомалар әдетте жұптармен ұйымдастырылады, бірдей мөлшердегі хромосомалар үшін олардың мөлшері және центромердің орналасуы бойынша реттеледі. Кариотиптеу әдетте жасуша циклының метафазасында жарық микроскопиясы мен фотосуреттеуді біріктіреді және фотомикрографиялық (немесе қарапайым микрографиялық) кариограммаға әкеледі. Керісінше, схемалық кариограмма – кариотиптің жобаланған графикалық бейнесі. Схемалық кариограммаларда әр хромосоманың тек бір әпкесі хроматидасы ғана қысқа болу үшін көрсетіледі, ал шындығында олар әдетте бір-біріне соншалықты жақын, тіпті жеткілікті ажыратымдылық болмаса, фотомикрограммаларда да біріктірілгендей көрінеді. Хромосомалардың толық жиынтығын зерттеу кейде кариология деп аталады. Кариотип организмнің хромосомалық санын және осы хромосомалардың жарық микроскопында қалай көрінетінін сипаттайды. Олардың ұзындығына, центромерлердің орналасуына, жолақтық үлгісіне, жыныс хромосомалары арасындағы кез келген айырмашылықтарға және басқа да физикалық ерекшеліктерге назар аударылады. Кариотиптерді дайындау және зерттеу цитогенетиканың бір бөлігі болып табылады. Жеке организмнің немесе түрдің соматикалық жасушаларындағы хромосомалардың негізгі саны соматикалық сан деп аталады және 2n деп белгіленеді. Жыныс жасушаларындағы хромосома саны n (адамда: n = 23). Осылайша, адамда 2n = 46. Демек, қалыпты диплоидты организмдерде аутосомалық хромосомалар екі данада кездеседі. Жыныс хромосомалары болуы мүмкін немесе болмауы мүмкін. Полиплоидты жасушаларда хромосомалардың бірнеше көшірмесі бар, ал гаплоидты жасушаларда бір ғана көшірмесі бар. Кариотиптер көптеген мақсаттар үшін қолданылуы мүмкін; мысалы, хромосомалық аберрацияларды, жасушалық функцияларды, таксономиялық байланыстарды, медицинаны зерттеу және өткен эволюциялық оқиғалар туралы ақпарат жинау (кариосистемтика).

Түске бояу

Кариотиптерді зерттеу бояу арқылы мүмкін болады. Әдетте, Giemsa сияқты қолайлы бояу, жасушалардың бөліну кезінде, әдетте метафаза немесе прометафаза кезінде, ең көп конденсацияланған кезде колхицин ерітіндісімен тоқтатылғаннан кейін қолданылады. Giemsa бояуының дұрыс жабысуы үшін барлық хромосомалық ақуыздар қорытылып, алынып тасталуы тиіс. Адамдар үшін ақ қан жасушалары ең көп қолданылады, себебі оларды тіндік мәдениетте бөлуге және өсіруге оңай болады. Кейде бөлінбейтін (интерфазалық) жасушалар да қарастырылуы мүмкін. Туылмаған ұрықтың жынысын интерфазалық жасушаларды қарау арқылы болжауға болады (амниоцентез және Барр денесі).

Көшірме нөмірі

Схемалық кариограммалар әдетте жасушалардың ең көп таралған күйі болып табылатын жасушалық циклден тыс (көбейгіш жасушалық циклден тыс) G0 фазасына сәйкес ДНК көшірмелерінің санын көрсетеді. Осы бөлімдегі схемалық кариограмма да осы күйді көрсетеді. Бұл күйде (сондай-ақ жасуша циклінің G1 фазасында) әрбір жасушада әр түрдің 2 автосомалық хромосомасы болады (2n деп белгіленеді), мұнда әрбір хромосоманың әр локустың бір көшірмесі бар, яғни әр локустың жалпы көшірме саны 2 (2c). Схемалық кариограмманың жоғарғы ортасында жасуша циклінің S фазасында (S деп белгіленген) ДНК синтезінен өткеннен кейін 3-ші хромосома жұбы да көрсетілген. Бұл аралық G2 фазасын және метафазаны ("Мета" деп белгіленген) қамтиды. Осы аралықта 2n саны сақталады, бірақ әрбір хромосоманың әр локусының 2 көшірмесі болады, онда әрбір бауырлас хроматид (хромосоманың қолы) центромерада біріктірілген, жалпы саны 4c-қа жетеді. Микроскопиялық кариограммалардағы хромосомалар да осы күйде болады, себебі олар көбінесе метафазада микроскопияланады, бірақ осы фазада әрбір хромосоманың екі көшірмесі бір-біріне соншалықты жақын болады, олардың ажыратылуы үшін суреттің шешімі жеткілікті жоғары болмаса, бірдей көрінеді. Шындығында, G0 және G1 фазаларында ядролық ДНК хроматин ретінде таралады және тіпті микроскопияда да көзге көрінетін хромосомаларды көрсетпейді. Адам жасушасына шаққандағы адам митохондриялық геномының көшірмелерінің саны 0-ден (эритроциттерде) 1,500,000-ға дейін (ооциттерде) өзгереді, бұл негізінен жасушадағы митохондриялардың санына байланысты.

Кариотиптердің әртүрлілігі мен эволюциясы

ДНК-ның репликациясы және транскрипциясы эукариоттарда жоғары стандартталған болғанымен, олардың кариотиптеріне қатысты осыны айтуға болмайды, себебі олар өте өзгергіш. Хромосома саны және құрылымдық ерекшеліктері түрлер арасында әртүрлі болады, олардың бірдей макромолекулалардан тұруына қарамастан. Бұл айырмашылықтар эволюциялық цитологиядағы зерттеулерге негіз болады. Кейбір жағдайларда тіпті бір түр ішінде де маңызды өзгерістер кездеседі. Годфри мен Мастерс жасаған шолуда былай делінеді:

Біздің пікірімізше, байқалған кариотиптік құрылымдардың кең ауқымын жеке процесс түсіндіре алмайды. Алайда, басқа филогенетикалық деректермен бірге қолданылғанда, кариотиптік бөліну бұрын түсіндірілемеген, жақын туысқан түрлер арасындағы диплоидтық сандардың айқын айырмашылықтарын түсіндіруге көмектеседі. Кариотиптер туралы сипаттамалық деңгейде көп мәлімет бар, сонымен қатар кариотиптік ұйымдастырудың өзгеруі көптеген түрлердің эволюциялық бағытына әсер еткені анық, бірақ оның жалпы маңызы әлі толыққанды түсініксіз. Кариотип эволюциясының себептері туралы біздің түсінігіміз өте төмен, көптеген мұқият зерттеулерге қарамастан, кариотип эволюциясының жалпы маңызы аңғарылмауда. |Майярд Смит

Даму кезіндегі өзгерістер

Гендік репрессияның орнына кейбір организмдер гетерохроматинді кең көлемде жоюға немесе кариотипке көрінетін басқа да бейімделу түрлеріне ұмтылады. Хромосомалардың жойылуы. Кейбір түрлерде, мысалы, көптеген сциарид шыбықтарында, даму кезінде толық хромосомалар жойылады. Хроматин азаюы (негізін қалаушы: Теодор Бовери). Бұл процесте, кейбір копеподтар мен Ascaris suum сияқты нематодтарда хромосомалардың бөліктері белгілі бір жасушаларда жойылады. Бұл процесс – жаңа теломерлер құрылып, гетерохроматиннің белгілі бір аймақтары жоғалатын, мұқият ұйымдастырылған геномдық қайта құрылымдалу. A. suum-да барлық соматикалық жасушалардың алғашқы жасушалары хроматин азаюына ұшырайды. Х-инактивациясы. Бір Х хромосомасының инактивациясы сүтқоректілердің ерте даму кезінде жүзеге асады (Барр денесі және дозалық компенсация қараңыз). Плаценталық сүтқоректілерде инактивация екі Х хромосомасының арасында кездейсоқ болады; осылайша сүтқоректі әйел Х хромосомаларына қатысты мозаикалық құрылымға ие. Қаптамалы сүтқоректілерде әкелік Х хромосомасы әрқашан инактивацияланады. Адам әйелдерінде шамамен 15% соматикалық жасушалар инактивациядан қашады, ал инактивацияланған Х хромосомасындағы әсер еткен гендердің саны жасушалар арасында өзгереді: фибробласт жасушаларында Барр денесіндегі гендердің шамамен 25% инактивацияланбайды.

Бір жиынтық хромосомалардың саны

Бір-біріне жақын түрлердің өзгермелілігінің керемет мысалы – Курт Бениршке мен Дорис Вурстер зерттеген мунджак. Қытайлық мунтжак, *Muntiacus reevesi*, диплоидтық саны 46, барлығы телоцентрикалық екені анықталды. Олар оның жақын туысы – үндістандық мунтжақтың, *Muntiacus muntjak*, кариотипін қарағанда, әйелдерде 6, ал еркектерде 7 хромосома бар екеніне таң қалды. Олар екі-үш жыл бойы бұл туралы айтпады, өйткені ұлпа өсіруде қателік болуы мүмкін деп ойлады, бірақ тағы бірнеше үлгі алғаннан кейін [олардың нәтижелерін] растады. Жануарлар арасындағы ең жоғары көрсеткіш 372 хромосомасы бар қысқа мұрынды осетр, *Acipenser brevirostrum*, болуы мүмкін. Артық немесе B хромосомаларының болуы хромосома саны тіпті бір араласатын популяция ішінде де өзгеруі мүмкін екенін көрсетеді; ал анеуплоидтар да бір мысал, бірақ бұл жағдайда олар популяцияның қалыпты мүшелері деп есептелмейді.

Негізгі сан

Кариотиптің негізгі саны, FN – хромосомалар жиынтығындағы көзге көрінетін негізгі хромосома қолдарының саны. Сондықтан, FN ≤ 2 x 2n, ал айырмашылық бір қолды (акроцентрлі немесе телоцентрлі) хромосомалардың санына байланысты. Адамда FN = 82, себебі бес акроцентрлі хромосома жұбы бар: 13, 14, 15, 21 және 22 (адамның Y хромосомасы да акроцентрлі). Фундаменталды аутосомалық сан немесе аутосомалық негізгі сан, FNa немесе AN – кариотиптің автосомалар (жынысқа байланысты емес хромосомалар) жиынтығы бойынша көзге көрінетін негізгі хромосома қолдарының саны.

Плоидты

Плоидия – жасушадағы хромосомалардың толық жиынтығының саны. Полиплоидия – жасушаларда екіден астам гомологты хромосома жиынтығы болғанда, көбінесе өсімдіктерде кездеседі. Степбинс айтуынша, бұл өсімдіктер эволюциясында маңызды рөл атқарады. Степбинс гүлді өсімдіктердің полиплоидты құрамын 30–35% деп бағалаған, бірақ астық тұқымдасы өсімдіктерде бұл көрсеткіш шамамен 70% құрайды. Төменгі сатыдағы өсімдіктерде (папоротниктер, атқуйрықтар және псилотальдар) полиплоидия да жиі кездеседі, ал кейбір папоротник түрлері гүлді өсімдіктердегі ең жоғары деңгейден асып түсетін полиплоидия деңгейіне жеткен. Жануарларда полиплоидия сирек кездеседі, бірақ кейбір топтар үшін маңызды. Туыс түрлердегі полиплоидтық қатарлар, бір ғана негізгі санның еселіктерінен тұратын болса, эуплоид деп аталады. Гаплодиплоидия – бір жыныстың диплоидты, ал екіншісінің гаплоидты болуы. Бұл гименоптераларда және басқа да кейбір топтарда кең таралған. Эндополиплоидия ересек, дифференциацияланған тіндерде митоздық бөліну тоқтағанда, бірақ ядроларда бастапқы соматикалық хромосома санынан көп хромосомалар болғанда пайда болады. Эндоциклде (эндомитоз немесе эндоредупликация) «тыныш» ядродағы хромосомалар қайта көбейеді, ал жаңа түзілген хромосомалар жабық ядролық мембрана ішінде бір-бірінен ажыратылады. Көп жағдайларда эндополиплоидты ядроларда ондаған мыңдаған хромосомалар болады (оларды нақты санау мүмкін емес). Жасушаларда әрқашан бірдей еселіктер (екідің дәрежелері) бола бермейді, сондықтан «жасуша бөлінбестен репликация нәтижесінде хромосома жиынтығының санының артуы» деген қарапайым анықтама толыққанды дұрыс емес. Бұл процесс (әсіресе жәндіктерде және жүгері сияқты кейбір жоғары сатыдағы өсімдіктерде зерттелген) биосинтез процесінде белсенді тіндердің өнімділігін арттыруға бағытталған даму стратегиясы болуы мүмкін. Бұл құбылыс эукариоталар әлемінде протозоялардан адамға дейін кездейсоқ кездеседі; ол әртүрлі және күрделі, сонымен қатар дифференциация мен морфогенез процестеріне көптеген жолдармен қызмет етеді. Ежелгі кариотиптік дупликацияларды зерттеу үшін палеополиплоидия туралы қараңыз.

Анеуплоидия

Анеуплоидия - бұл жасушалардағы хромосома санының түрге тән қалыпты санынан өзгеше болу жағдайы. Бұл қосымша хромосоманың немесе бір немесе бірнеше хромосоманың жоғалуы сияқты хромосомалық аномалияға алып келеді. Хромосома санының бұзылыстары көбінесе даму ақауларын тудырады. Даун синдромы және Тернер синдромы осыған мысалдар. Анеуплоидия жақын туысқан түрлер тобында да кездесуі мүмкін. Өсімдіктердегі классикалық мысалдар – Крепис туысы, онда гаметтік (= гаплоидты) сандар x = 3, 4, 5, 6 және 7 сериясын құрайды; сондай-ақ Крокус, онда x = 3-тен x = 15-ке дейінгі әрбір сан кем дегенде бір түрмен ұсынылған. Әртүрлі дәлелдер эволюцияның әртүрлі топтарда әртүрлі бағыттарда жүргенін көрсетеді. Приматтарда үлкен маймылдардың 24х2 хромосомасы бар, ал адамда 23х2 хромосома бар. Адамның 2-ші хромосомасы ататектердің хромосомаларының бірігуі нәтижесінде пайда болды, бұл оның санын азайтты.

Хромосомалық полиморфизм

Кейбір түрлер хромосомалардың әртүрлі құрылымдық формалары бойынша полиморфты болып табылады. Бұл құрылымдық өзгеріс әртүрлі жеке дарабастардағы хромосомалардың әртүрлі санымен байланысты болуы мүмкін, мысалы, құмырсқа қоңызы (Chilocorus stigma), Ameles туысына жататын кейбір мантидтерде, сондай-ақ еуропалық шыршада (Sorex araneus) кездеседі. Бриттания жағалауындағы Thais lapillus (ит балық) моллюскісінің мысалында, екі хромосомалық морфтың әртүрлі ортаға бейімделгендігіне қатысты белгілі бір дәлелдер бар.

Ағаш түрлері

Политен хромосомалары бар жәндіктердегі хромосомалық жолақтың егжей-тегжейлі зерттеуі, жақын туысқан түрлер арасындағы байланысты анықтауға мүмкіндік береді: классикалық мысал – Хэмптон Л. Карсонның Гавайи дрософилидтеріндегі хромосомалық жолақты зерттеуі. Гавай аралдарының 16 835 км² аумағында, жаңбырлы орманнан бастап, субальпілік шалғындарға дейін тіршілік ететін әлемдегі ең көптеген дрософилид шыбықтары қоныстанған. Гавайидің шамамен 800 дрософилид түрі көбінесе Drosophila және Scaptomyza туыстарын қамтитын екі тұқымға жатады. Гавай дрософилидтерінің ең жақсы зерттелген тобы – «сурет қанаттылар» тобының политенді жолақтары, Карсонға геномдық талдау мүмкін болмай тұрып-ақ эволюциялық ағашты құруға мүмкіндік берді. Бір жағынан, гендердің орналасуы әр хромосоманың жолақтарында көрінеді. Хромосомалық реттелулер, әсіресе инверсиялар, қай түрлердің жақын туыс екенін анықтауға көмектеседі. Нәтижелер анық. Ағаш түрінде көрсетілген инверсиялар (барлық басқа ақпараттан тәуелсіз), түрлердің ескі аралдардан жаңа аралдарға қарай «ағылуын» нақты көрсетеді. Сондай-ақ, ескі аралдарға қайта отарлау және аралдарды өткіріп жіберу жағдайлары да кездеседі, бірақ олар одан әлдеқайда сирек. K-Ar талдауы бойынша, қазіргі аралдардың жасы 0,4 миллион жыл бұрын (млжж) (Мауна-Кеа) және 10 миллион жыл бұрын (млжж) (Некер) аралығында. Гавай архипелагының теңіз деңгейінен жоғары орналасқан ең көне мүшесі – Куре атолы, ол 30 миллион жыл бұрын пайда болған. Архипелагтың өзі (Тынық мұхиты тақтасының қозғалысынан пайда болған) одан да ұзақ жылдар бойы, кем дегенде, бор дәуірінен бері қалыптасқан. Бұрынғы аралдар, қазір теңіз астында (гиоттар) Император теңіз тауларының тізбегін құрайды. Гавайидегі барлық жергілікті Drosophila және Scaptomyza түрлері, әдетте, аралдарды 20 миллион жыл бұрын отарлаған жалғыз ата-баба түрінен тараған. Келесі адаптивті сәулелену, бәсекелестіктің болмауы және нишалардың көп болуымен шақырылды. Бір жүкті ұрғашының аралды отарлауы мүмкін болғанымен, бұл бір түрдің тобы болуы ықтимал. Гавай архипелагында осыған ұқсас, бірақ аз айқын адаптивті сәулеленуге ұшыраған басқа да жануарлар мен өсімдіктер бар.

Хромосомалық жолақтар

Хромосомаларға белгілі бір бояулар қолданған кезде жолақты үлгі көрінеді. Бұл жолақтар – хромосомалардың бойындағы кезектесетін ақ және қара түсті жолақтар. Хромосомаларды анықтау және хромосомалық аберрацияларды, оның ішінде хромосоманың үзілуін, жоғалуын, көбейіп кетуін, транслокациясын немесе инверсиясын диагностикалау үшін ерекше жолақты үлгілер пайдаланылады. Хромосомаларға түрліше әсер ету нәтижесінде әртүрлі жолақты үлгілер пайда болады: G жолақтары, R жолақтары, C жолақтары, Q жолақтары, T жолақтары және NOR жолақтары.

Классикалық кариотиптік цитогенетика

"Классикалық" (суретте көрсетілген) кариотипте хромосомалардың жолақтарын бояу үшін көбінесе Гиемса (G-жолақтары), сирек мепакрин (хинакриндік) бояуы қолданылады. Гиемса ДНК-ның фосфат топтарына тән. Хинакриндік аденин-тиминге бай аймақтарға байланысады. Әрбір хромосоманың ерекше жолақты үлгісі болады, ол оларды анықтауға көмектеседі; жұпталған екі хромосоманың жолақты үлгісі де бірдей болады. Кариотиптер хромосоманың қысқа жағы жоғары, ал ұзын жағы төмен орналастырылады. Кейбір кариотиптерде қысқа және ұзын жақтарды p және q деп белгілейді. Сонымен қатар, әртүрлі боялған аймақтар мен кіші аймақтарға хромосома қолдарының проксимальдық бөлігінен дистальдық бөлігіне қарай сандық белгілер беріледі. Мысалы, Кри-дю-ша синдромы 5-хромосоманың қысқа жағындағы жоғалумен байланысты. Бұл синдром үшін маңызды аймақ – p15.2 (хромосомадағы локус) жоғалуы, ол 46,XX,del(5)(p15.2) деп жазылады.

Көп түсті FISH (mFISH) және спектрлік кариотип (SKY техникасы)

Көп түсті FISH және спектралды кариотипизацияның бұрынғы нұсқасы – молекулалық цитогенетикалық әдістер, олар организмдегі хромосомалардың барлық жұптарын әртүрлі түстерде бір уақытта көрсету үшін қолданылады. Әрбір хромосомаға арналған флуоресценттік белгіленген зондтар хромосомаға тән ДНК-ны әртүрлі флюорофорлармен белгілеу арқылы жасалады. Флюорофорлардың спектральды түрлерінің саны шектеулі болғандықтан, көптеген әртүрлі түстерді жасау үшін комбинаторлық белгілеу әдісі қолданылады. Флюорофорлардың комбинациялары флуоресценттік микроскоппен 7 дейін тар жолақты флуоресценттік сүзгілерді пайдалану арқылы немесе спектралды кариотипизация жағдайында флуоресценттік микроскопқа қосылған интерферометр арқылы түсіріліп, талданады. mFISH суретінде алынған бастапқы суреттердегі фторхромдардың әрбір комбинациясы арнайы суреттерді талдау бағдарламасында псевдотүспен алмастырылады. Осылайша хромосомаларды немесе хромосома бөлімдерін визуализациялау және анықтау мүмкін болады, бұл хромосомалық өзгерістерді талдауға мүмкіндік береді. Спектралды кариотипизацияда сурет өңдеу бағдарламалық жасақтамасы әр спектральды комбинацияға псевдотүс тағайындайды, бұл жеке-жеке түсті хромосомаларды визуализациялауға мүмкіндік береді. Көп түсті FISH қатерлі жасушаларда және басқа ауру жағдайларында Гиемса жолақтары немесе басқа әдістер жеткілікті дәлдік бермеген кезде хромосомалық аберрацияларды анықтау үшін қолданылады.

Цифрлық кариотипі

Цифрлық кариотипілеу – геномдық деңгейде ДНК көшірме санының мөлшерін анықтауға қолданылатын әдіс. Геномның әртүрлі локустарынан алынған қысқа ДНК тізбектері бөлініп, саналады. Бұл әдіс сондай-ақ виртуалды кариотипілеу деп те аталады. Осы техниканы пайдалану арқылы метафазалық хромосомаларды қолданатын әдістермен анықтау мүмкін емес, адам геномындағы шағын өзгерістерді анықтауға болады. Кейбір локустардың жойылуы қатерлі ісіктердің дамуымен байланысты екені белгілі. Мұндай жойылулар цифрлық кариотипілеу арқылы, қатерлі ісік дамуымен байланысты локустарды қолдана отырып табылады.

Хромосомалық аномалиялар

Хромосомалық аномалиялар сандық – қосымша немесе жетіспейтін хромосомалардың болуы, немесе құрылымдық – туынды хромосомалар, транслокациялар, инверсиялар, ірі масштабты жойылулар немесе дубликациялар түрінде болуы мүмкін. Сандық аномалиялар, сондай-ақ анеуплоидия деп аталады, көбінесе гамета түзілу кезінде мейоз кезіндегі бөлшектенудің нәтижесінде пайда болады; трисомиялар, онда әдеттегі екінің орнына үш хромосома көшірмесі болады, – жиі кездесетін сандық аномалиялар. Құрылымдық аномалиялар көбінесе гомологтық рекомбинациядағы қателерден туындайды. Аномалиялардың екі түрі де гаметаларда пайда болуы мүмкін, сондықтан олар зардап шеккен адамның барлық жасушаларында кездеседі, немесе митоз кезінде пайда болып, кейбір жасушалары қалыпты, ал кейбіреулері аномальды болатын генетикалық мозаикалық индивидуумға әкелуі мүмкін.