Введение
Нильский синий (или Нильский синий А) — это краситель, используемый в биологии и гистологии. Его можно применять к живым или фиксированным клеткам, и он окрашивает клеточные ядра в синий цвет. Также его можно использовать совместно с флуоресцентной микроскопией для выявления полигидроксибутиратных гранул в прокариотических или эукариотических клетках. При кипячении раствора нильского синего с серной кислотой образуется нильский красный (оксазон нильского синего).
Рабочий процесс
Образец или замороженные срезы фиксируют в формальдегиде, затем погружают в раствор нильского синего на 20 минут или в нильский синий А на 30 секунд (1% мас./об. в дистиллированной воде) и промывают водой. Для лучшей дифференциации его погружают в 1% уксусной кислоты на 10–20 минут или на 30 секунд до получения чистых цветов. Это может занять всего 1–2 минуты. Затем образец тщательно промывают водой (в течение одного-двух часов). После этого окрашенный препарат помещают на предметное стекло микроскопа и удаляют излишки воды. Образец можно заключать в глицерин или глицериновый желатин.
Результаты
Ненасыщенные глицериды розовые, ядра и эластины темные, жирные кислоты и разнообразные жироподобные вещества и смеси жиров – фиолетово-голубые.
Пример: обнаружение гранул поли-β-гидроксибутирата (PHB)
Гранулы PHB в клетках Pseudomonas solanacearum можно визуализировать с помощью окрашивания Нильским синим A. Гранулы PHB в окрашенных мазках наблюдают с помощью эпифлюоресцентного микроскопа при иммерсии в масло, при увеличении в 1000 раз; при длине волны возбуждения 450 нм они демонстрируют сильную оранжевую флуоресценцию.
Синий Нил в ДНК электрофорезе
Нильский синий также используется в различных коммерческих препаратах для окрашивания ДНК, применяемых при электрофорезе ДНК. В отличие от бромида этидия, для визуализации в агарозном геле не требуется УФ-трансиллюминация, поэтому его можно использовать для наблюдения за ДНК в процессе разделения, а также в качестве красителя, облегчающего выделение фрагментов ДНК из геля, без повреждений, вызванных УФ-излучением.
Синий Нил в онкологии
Дериваты синего Нила являются потенциальными фотосенсибилизаторами в фотодинамической терапии злокачественных опухолей. Эти красители агрегируют в опухолевых клетках, особенно в липидных мембранах, и/или накапливаются и концентрируются в субклеточных органеллах. С помощью производного нильского синего N-этилнильского синего (EtNBA) нормальные и предраковые ткани в экспериментах на животных можно различить с помощью флуоресцентной спектроскопии при флуоресцентной визуализации. EtNBA не проявляет фототоксических эффектов.
Синтез
Нильский синий и родственные ему красители нафтоксазинового ряда могут быть получены посредством кислотно-каталитической конденсации либо 5-(диалкиламино)-2-нитрозофенолов с 1-нафтиламином, 3-(диалкиламино)фенолов с N-алкилированными 4-нитрозо-1-нафтиламинами, либо N,N-диалкил-1,4-фенилендиаминов с 4-(диалкиламино)-1,2-нафтохинонами. В качестве альтернативы, продукт кислотно-каталитической конденсации 4-нитрозо-N,N-диалкиланилина с 2-нафтолом (соль 9-(диалкиламино)бензо[a]феноксазин-7-ия) может быть окислен в присутствии амина, вводя второй аминозаместитель в 5-е положение бензо[a]феноксазиновой системы. Следующая схема иллюстрирует первый из этих четырех подходов, приводящий к перхлорату Нильского синего.