Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
Нил көгі (немесе Нил көгі А) – биология және гистологияда қолданылатын бояу. Оны тірі немесе бекітілген жасушалармен қолдануға болады және жасуша ядроларын көк түспен бояйды. Сонымен қатар, прокариоттық немесе эукариоттық жасушалардағы полигидроксибутират гранулаларының болуын анықтау үшін оны флуоресценттік микроскопиямен бірге пайдалануға болады. Нил көгінің ерітіндісін күкірт қышқылымен қайнатқанда Нил қызыл (Нил көгі оксазоны) түзіледі.
Nile blue (or Nile blue A) is a stain used in biology and histology. It may be used with live or fixed cells, and imparts a blue colour to cell nuclei. It may also be used in conjunction with fluorescence microscopy to stain for the presence of polyhydroxybutyrate granules in prokaryotic or eukaryotic cells. Boiling a solution of Nile blue with sulfuric acid produces Nile red (Nile blue oxazone).
Жұмыс ағыны
Үлгі немесе мұздатылған бөліктер формальдегидте бекітіледі, содан кейін 20 минут Нил көк ерітіндісіне немесе 30 секунд Нил көк А-ға (дистильденген суда 1% w/v) салынып, сумен шайылады. Жақсырақ ажырату үшін оны 10–20 минутқа немесе түстер таза болғанға дейін 30 секундқа 1% сірке қышқылына батырады. Бұл 1–2 минутқа созылуы мүмкін. Содан кейін үлгі сумен мұқият шайылады (бір-екі сағат бойы). Содан кейін боялған үлгі микроскопқа салынып, артық су алынып тасталады. Үлгі глицеринге немесе глицерин-желатинге орналастырылуы мүмкін.
The sample or frozen sections is/are fixated in formaldehyde, then immersed for 20 minutes in the Nile blue solution or 30 sec in nile blue A (1% w/v in distilled water) and rinsed with water. For better differentiation, it is dipped in 1% acetic acid for 10–20 minutes or 30 sec until the colors are pure. This might take only 1–2 minutes. Then the sample is thoroughly rinsed in water (for one to two hours). Afterwards, the stained specimen is taken on a microscope slide and excess water is removed. The sample can be embedded in glycerol or glycerol gelatin.
Нәтижелер
Қанықпаған глицеридтер қызғылт түсті, ядролар мен эластиндер қара, май қышқылдары және әртүрлі майлы заттар мен май қоспалары күлгін-көк түсті.
Unsaturated glycerides are pink, nuclei and elastins are dark, fatty acids and various fatty substances and fat mixtures are purple blue.
Мысал: поли-β-гидроксибутират түйіршіктерін (PHB) анықтау
Pseudomonas solanacearum клеткаларындағы PHB түйіршіктерін Найл көк А бояуымен көруге болады. Боялған препараттардағы PHB түйіршіктері майға батырып, 1000 есе үлкейтумен эпифлюоресценттік микроскоппен қарастырылады; 450 нм қоздыру толқын ұзындығында олар күшті апельсин түсті флуоресценцияны көрсетеді.
The PHB granules in the cells of Pseudomonas solanacearum can be visualized by Nile blue A staining. The PHB granules in the stained smears are observed with an epifluorescence microscope under oil immersion, at a 1000 times magnification; under 450 nm excitation wavelength they show a strong orange fluorescence.
ДНК электрофорезі бойынша Ніл көгі
Нил көгі ДНК электрофорезіне қолданылатын әртүрлі коммерциялық ДНК бояу құрамында да пайдаланылады. Этидий бромид сияқты агароза гельінде көру үшін ультракүлгін сәулелендіруді қажет етпейтіндіктен, оны ДНК бөлінуін бақылау үшін, сондай-ақ ДНК фрагменттерін ультракүлгін сәулеленуден зақым келтірмей гельден алуға көмектесетін бояу ретінде қолдануға болады.
Nile blue is also used in a variety of commercial DNA staining formulations used for DNA electrophoresis. As it does not require UV trans illumination in order to be visualised in an agarose gel as with ethidium bromide, it can be used to observe DNA as it is separated and also as a dye to aid in gel extraction of DNA fragments without incurring damage by UV irradiation.
Онкологиядағы Нил көгі
Нил көкінің туындылары қатерлі ісіктердің фотодинамикалық терапиясында потенциалды фотосенсибилизаторлар болып табылады. Бұл бояулар ісік жасушаларында, әсіресе липидті мембраналарда жиналады және/немесе субклеткалық органеллаларда бөлініп, шоғырланады. Нил көкінің туындысы N-этил Нил көк (EtNBA) жануарлар тәжірибелеріндегі қалыпты және қатерге ұшырау алдындағы тіндерді флуоресценттік бейнелеуде флуоресценттік спектроскопия арқылы ажыратуға мүмкіндік береді. EtNBA фототоксикалық әсер көрсетпейді.
Derivatives of Nile blue are potential photosensitizers in photodynamic therapy of malignant tumors. These dyes aggregate in the tumor cells, especially in the lipid membranes, and/or are sequestered and concentrated in subcellular organelles. With the Nile blue derivative N ethyl Nile blue (EtNBA), normal and premalignant tissues in animal experiments can be distinguished by fluorescence spectroscopy in fluorescence imaging. EtNBA shows no phototoxic effects.
Синтез
Нил көк және ұқсас нафтоксазиний бояуларын 5 (диалкиламин) 2 нитрозофенолдарды 1-нафтиламинмен, 3 (диалкиламин) фенолдарды N-алкилденген 4 нитрозо-1-нафтиламинмен немесе N,N-диалкил-1,4-фенилендиаминдерді 4 (диалкиламин)-1,2-нафтохинонмен қышқыл катализінде конденсациялау арқылы алуға болады. Балама ретінде, 4 нитрозо-N,N-диалкиланилиннің 2-нафтолмен қышқыл катализінде конденсациясының өнімі (9 (диалкиламин)бензо[a]феноксазин-7-иум тұзы) аминнің қатысуымен тотыққанда, бензо[a]феноксазиний жүйесінің 5-орынына екінші амин тобын енгізеді. Төмендегі схема осы төрт тәсілдің біріншісін көрсетеді, нәтижесінде Нил көк перхлораты алынады:
Nile Blue and related naphthoxazinium dyes can be prepared by acid catalyzed condensation of either 5 (dialkylamino) 2 nitrosophenols with 1 naphthylamine, 3 (dialkylamino)phenols with N alkylated 4 nitroso 1 naphtylamines, or N,N dialkyl 1,4 phenylenediamines with 4 (dialkylamino) 1,2 naphthoquinones. Alternatively, the product of an acid catalyzed condensation of 4 nitroso N,N dialkylaniline with 2 naphthol (a salt of 9 (dialkylamino)benzo[a]phenoxazin 7 ium) can be oxidized in the presence of an amine, installing a second amino substituent in 5 position of the benzo[a]phenoxazinium system. The following scheme illustrates the first of these four approaches, leading to Nile Blue perchlorate: