Кіріспе

Ферменттер класы

Пируваткиназа – гликолиздің соңғы қадамына қатысатын фермент. Ол фосфоэнолпируваттан (ФЕП) аденозин дифосфатына (АДФ) фосфат тобының ауысуын катализдейді, нәтижесінде бір молекула пируват және бір молекула АТФ түзіледі. Пируваткиназа бұрынында дұрыс есімделмеген (қалыпты киназаға сәйкес келмейтін), себебі пируваттың фосфорилирленуін тікелей катализдемейтіні анықталған, ал мұндай процесс физиологиялық жағдайларда жүрмейді. Жануарларда пируваткиназа төрт түрлі, тіндік ерекше изоэнзимдер түрінде кездеседі, олардың әрқайсысы әртүрлі тіндердің метаболизмі талаптарына бейімделуге қажетті нақты кинетикалық қасиеттерге ие.

Омыртқалы жануарлардағы изоферменттер

Омыртқалыларда экспрессияланатын пируваткиназаның төрт изоэнзимі бар: L (бауыр), R (эритроциттер), M1 (бұлшықет және ми) және M2 (жас ұрықтың тіндері және көптеген ересек тіндер). L және R изоэнзимдері PKLR генімен, ал M1 және M2 изоэнзимдері PKM2 генімен экспрессияланады. R және L изоэнзимдері M1 және M2 изоэнзимдерінен аллостериялық реттелу қабілетімен ерекшеленеді. Кинетикалық тұрғыдан пируваткиназаның R және L изоэнзимдері екі бөлек конформациялық күйге ие: біреуі жоғары субстраттық туыстығымен, екіншісі төмен субстраттық туыстығымен. Жоғары субстраттық туыстығымен сипатталатын R күйі, пируваткиназаның белсенді түрі болып табылады және PEP және фруктоза 1,6-бисфосфаты (FBP) арқылы тұрақтандырылады, гликолиз жолын ынталандырады. Төмен субстраттық туыстығымен сипатталатын T күйі, пируваткиназаның белсенді емес түрі болып табылады, ATP және аланинмен байланысып, тұрақтандырылады, пируваткиназаның фосфорилдануына және гликолиздің тежелуіне алып келеді. Пируваткиназаның M2 изоэнзимі тетрамерлерді немесе димерлерді құрай алады. Тетрамерлердің PEP-ке туыстығы жоғары, ал димерлердің PEP-ке туыстығы төмен. Ферменттік белсенділікті PKM2-нің жоғары белсенді тетрамерлерін инактивацияланған димерлерге фосфорилдау арқылы реттеуге болады. PKM гені 12 экзоннан және 11 интрондан тұрады. PKM1 және PKM2 – M генінің әртүрлі спилинг өнімдері (PKM1 9-экзонды, ал PKM2 10-экзонды қамтиды) және олар карбоксильдік ұшындағы 56 аминқышқылылық сегментте (аа 378-434) 23 аминқышқылымен ғана ерекшеленеді. PKM гені гетерогенді рибонуклеотидтік ақуыздар, мысалы, hnRNPA1 және hnRNPA2 арқылы реттеледі. Адамның PKM2 мономері 531 аминқышқылынан тұрады және A, B және C домендеріне бөлінген бір тізбекті болып табылады. PKM1 мен PKM2 арасындағы аминқышқылы тізбегінің айырмашылығы PKM2-ге FBP арқылы аллостериялық реттелуге және димерлер мен тетрамерлер құруға мүмкіндік береді, ал PKM1 тек тетрамерлерді ғана құрай алады.

Бактериядағы изозимдер

Көптеген энтеробактериялар, соның ішінде E. coli, пируват киназасының екі изоформасын қамтиды: PykA және PykF, олар E. coli (Uniprot: PykA, PykF) бойынша 37% ұқсас. Олар эукариоттардағыдай бірдей реакцияны катализдейді, атап айтқанда АДФ және ПЭФ-тан АТФ-ты жасау, гликолиздің соңғы қадамы, бұл физиологиялық жағдайларда қайтымсыз қадам. PykF, FBP арқылы аллостериялық түрде реттеледі, бұл PykF-тің жасушалық метаболизмдегі орталық ролін көрсетеді. E. coli-дегі PykF транскрипциясы жаһандық транскрипциялық реттегіш Cra (FruR) арқылы реттеледі. Фруктоза-6-фосфаттың (Фр 6Ф) төмен концентрациясында PfkB MgATP арқылы тежеледі және бұл реттелу глюконеогенез үшін маңызды.

Гликолиз

Гликолизде пируват киназа реакциясы екі кезеңнен тұрады. Біріншіден, PEP фосфат тобын ADP-ге беріп, ATP және пируват энолятын түзетін болады. Екіншіден, жасушаға қажетті пируваттың функционалдық түрін алу үшін пируват энолятына протон қосылуы керек. Пируват киназаның субстраты қарапайым фосфоқант болғандықтан, ал өнімі ATP болғандықтан, пируват киназа гликолиз циклының эволюциясы үшін негізгі фермент болуы мүмкін және жердегі барлық тіршілік иелерінің ең ежелгі ферменттерінің бірі болуы ықтимал. Фосфоенолпируват абиотикалық жағдайда пайда болуы мүмкін және триоза гликолизінің алғашқы жолында жоғары өніммен өндірілетіні дәлелденді. Ашытқы жасушаларында ашытқы пируват киназасының (YPK) PEP және оның аллостериялық эффекторы фруктоза-1,6-бисфосфат (FBP)пен өзара әрекеттесуі Mg2+ қатысуымен күшейеді. Сондықтан Mg2+ пируват киназаның PEP-ті пируватқа катализдейтін маңызды кофактор екені қорытындыланды. Бұдан әрі, Mn2+ металл ионы Mg2+-ға қарағанда YPK-ге ұқсас, бірақ күштірек әсер ететіні көрсетілді. Пируват киназаның металл байланысу орындарына металл иондарының байланысуы осы реакцияның жылдамдығын арттырады. Пируват киназа катализдейтін реакция гликолиздің соңғы кезеңі болып табылады. Бұл жолдың үш жылдамдық шектеуші кезеңдерінің бірі. Жылдамдық шектеуші кезеңдер – жолдың баяу, реттелетін кезеңдері, сондықтан жолдың жалпы жылдамдығын анықтайды. Гликолизде жылдамдық шектеуші кезеңдер ATP гидролизіне немесе ADP фосфорилирлеуіне байланысты, бұл жолды жасушаларда энергетикалық тұрғыдан тиімді және негізінен қайтымсыз етеді. Бұл соңғы кезең жоғары реттелген және қасақана қайтымсыз, өйткені пируват – келесі метаболикалық жолдар үшін маңызды аралық құрылымдық блок. Пируват пайда болғаннан кейін, ол аэробтық жағдайда ATP-ны одан әрі өндіру үшін TCA циклына кіреді немесе анаэробтық жағдайда сүт қышқылына немесе этанолға айналады.

Глюконеогенез: кері реакция

Пируват киназа сонымен қатар глюконеогенезді реттейтін фермент ретінде қызмет етеді, бұл бауыр пируваттан және басқа субстраттардан глюкоза жасауға арналған биохимиялық жол. Глюконеогенез қаншалықты аштық болса, ми мен қызыл қан клеткаларын глюкозамен қамтамасыз ету үшін көмірсулар емес көздерді пайдаланады, тікелей глюкоза қоры таусылғанда. FBP және Серин пируват киназаның тетрамеризациясын ынталандырады, ал L-цистеин тетрамердің диссоциациясын ынталандырады.

Фруктоза-1,6-бисфосфат

FBP – бұл реттеудің ең маңызды көзі, себебі ол гликолиз жолының ішінде пайда болады. FBP – фруктоза-6-фосфатының фосфорилирленуінен түзілетін гликолиттік аралық қосылыс. FBP пируваткиназаның C доменіндегі аллостерикалық байланыс орнына байланысып, ферменттің құрылымын өзгертеді, осы арқылы пируваткиназаның активтілігін күшейтеді. Гликолиз жолындағы аралық қосылыс ретінде FBP алдын ала ынталандыруды қамтамасыз етеді, себебі FBP концентрациясы жоғары болған сайын, пируваткиназаның аллостерикалық активтенуі мен активтілігі де артады. Пируваткиназа FBP-нің әсеріне ең сезімтал. Осының нәтижесінде, қалған реттеу механизмдері қосымша түзету ретінде жұмыс істейді.

Ковалентті модификаторлар

Ковалентті модификаторлар ферменттердің фосфорилирленуін, дефосфорилирленуін, ацетилденуін, сукцинилденуін және тотығуын бақылау арқылы жанама реттегіштер болып табылады, нәтижесінде ферменттік белсенділік күшейеді немесе тежеледі. Бауырда глюкагон және адреналин А протеинкиназасын белсендіреді, ол пируваткиназаны фосфорилдеу және инактивациялау арқылы ковалентті модификатор рөлін атқарады. Керісінше, қандағы қант деңгейінің жоғарылауына жауап ретінде инсулин секрециясы I фосфопротеин фосфатазасын белсендіреді, бұл пируваткиназаның дефосфорилирленуіне және активтенуіне алып келіп, гликолизді күшейтеді. Осы ковалентті модификация глюконеогенез ферменттеріне кері әсер етеді. Бұл реттеу жүйесі пируваткиназа мен глюконеогенезді катализдейтін ферменттердің бір уақытта белсендірілуін болдырмау арқылы нәтижесіз циклдің алдын алуға жауапты.

Гормоналды бақылау

Пайдасыз циклдің алдын алу үшін гликолиз және глюконеогенез бір уақытта клеткада жұмыс істемеуін қамтамасыз ету мақсатында қатаң түрде реттеледі. Осының салдарынан, пируваткиназаның глюкагон, циклдық АМФ және адреналинмен тежелуі ғана емес, гликолизді тоқтатып қана қоймай, сонымен қатар глюконеогенезді де күшейтеді. Керісінше, инсулин глюкагон, циклдық АМФ және адреналиннің әсеріне қарсы әрекет етеді, нәтижесінде пируват киназа қалыпты жұмыс істейді және глюконеогенез тоқтатылады. Бұдан бөлек, глюкоза глюконеогенезді тежейтіні және бұзатыны анықталды, ал пируват киназаның активтілігі мен гликолизке әсер етпейді. Жалпы алғанда, гормондардың өзара әрекеттесуі клеткадағы гликолиз бен глюконеогенездің жұмыс істеуі мен реттелуінде маңызды рөл атқарады.

Метформиннің ингибиторлық әсері

Метформин немесе диметилбигуанид – 2-типті қант диабетін емдеуде қолданылатын басты дәрі. Метформин глюконеогенезді тежеу арқылы пируват киназаға жанама түрде әсер ететіні дәлелденген. Атап айтқанда, метформин қосылғанда глюкоза ағыны күрт төмендеп, лактат/пируват ағыны әртүрлі метаболизм жолдарынан артады. Метформин пируват киназаның белсенділігіне тікелей әсер етпесе де, АТФ концентрациясын төмендетеді. АТФ-тың пируват киназаға аллостериялық тежеуші әсері болғандықтан, АТФ төмендегенде тежелу азайып, пируват киназа стимуляцияланады. Осының салдарынан пируват киназа белсенділігінің артуы метаболизм ағынын глюконеогенезге емес, гликолизге бағыттайды.

Гендік реттеу

Гетерогенді рибонуклеотидтік ақуыздар (hnRNP) PKM геніне әсер етіп, M1 және M2 изоформаларының экспрессиясын реттеуге қабілді. PKM1 және PKM2 изоформалары – PKM генінің бір экзонмен айырмашылығы бар сплайс варианттары. Гипоксия жағдайында hnRNPA1 және hnRNPA2 сияқты әртүрлі hnRNP түрлері ядроға еніп, экспрессияны модуляциялап, PKM2 өрбуіне (жоғары реттелуіне) ықпал етеді. Инсулин сияқты гормондар PKM2 экспрессиясын жоғарылатады, ал трийодотиронин (T3) және глюкагон сияқты гормондар PKM2 экспрессиясын төмендетеді.

Көмірсутектің реакциялық элементімен байланысу протеині (ChREBP)

ChREBP – пируваткиназаның L изоферментінің экспрессиясын реттейтін транскрипциялық фактор. Глюкозаны сезу модулі глюкоза және cAMP концентрациясына байланысты реттеуші фосфорилирлеуге ұшырайтын домендерді қамтиды, бұл оның ядроға тасымалдалуын бақылайды. Ол сондай-ақ глюкоза-6-фосфатқа тікелей байланысу арқылы қосымша белсендірілуі мүмкін. Ядроға енгеннен кейін, оның ДНҚ-мен байланысатын домендері пируваткиназа транскрипциясын жақсартады.

PK-LR генінің мутациясы

Пируваткиназаның жетіспеушілігі аутосомалық рецессивті қасиеттің салдарынан туындайды. Сүтқоректілерде екі пируваткиназа гені бар: PK LR (пируваткиназа L және R изоэнзимдерін кодтайтын) және PK M (пируваткиназа M1 изоэнзимін кодтайтын), бірақ пируваткиназа жетіспеушілігіне әсер ететін қызыл қан изоэнзимін тек PKLR гені кодтайды. 250-ден астам PK LR генінің мутациялары анықталды және пируваткиназа жетіспеушілігімен байланысты екені көрсетілді. ДНК-тестілеу 1-хромосомадағы PKLR генінің орналасқан жерін анықтауға және пируваткиназа жетіспеушілігін молекулалық деңгейде диагностикалауға арналған тікелей гендік секвенирлеу тесттерін әзірлеуге көмектесті.

Реактивті оттегінің түрлерін (РОС) ингибициялау

Реактивті оттегі түрлері (РОС) – оттегінің химиялық тұрақсыз түрлері. Адам өкпе жасушаларында ROS пируваткиназаның (PKM2) M2 изоферментін тежеуге қабілетті екені анықталды. ROS бұл тежеуді Cys358-ді тотықтыру арқылы және PKM2-нің белсенділігін жою арқылы іске асырады. PKM2 белсенділігінің төмендеуі салдарынан глюкоза ағыны пируватқа айналмай, керісінше пентоза фосфат жолында қолданылады, нәтижесінде РОС азайып, залалсыздандырылады. Осылайша, РОС-тың зиянды әсері күшейеді және өкпе жасушаларында оксидативтік стресс тудырады, бұл ісік пайда болуына әкелуі мүмкін. Бұл тежеу механизмі маңызды, себебі ол PKM2-дегі реттеуші механизмдердің қатерлі жасушалардың оксидативтік стреске төзімділігін арттыруға және ісік дамуын жеделдетуге жауапты болуы мүмкін.

Фенилаланинді ингибициялау

Фенилаланин мидағы пируваткиназаның бәсекелестік тежегіші ретінде әрекет етеді. Фенилаланиннің тежегіш әрекетінің күші ұрықтық және ересек жасушаларда шамалас болғанымен, ұрықтың ми жасушаларындағы ферменттер ересек ми жасушаларындағы ферменттерге қарағанда тежелуге әлдеқайда осал. Фенилкетонурия (ФКУ) генетикалық ми ауруы бар нәрестелерде ПКМ2-ні зерттеу фенилаланин деңгейінің жоғары екенін және ПКМ2-нің тиімділігінің төмендегенін көрсетті. Бұл тежегіш механизм пируваткиназаның ми жасушаларының зақымдануындағы рөлін түсінуге көмектеседі.

Пируваткиназаның қатерлі ісіктердегі әсері

Қатерлі жасушалар ерекше түрде үдеген метаболизмге ие, және пируваткиназаның қатерлі ісіктердегі рөлі бар деп саналады. Денсау жасушалармен салыстырғанда, қатерлі жасушаларда PKM2 изоформасының деңгейі жоғарылайды, әсіресе төмен белсенділігі бар димер түрінде. Сондықтан, PKM2 қан сарысуының деңгейі қатерлі ісіктің белгісі ретінде қолданылады. Төмен белсенділігі бар димер фосфоэнолпируваттың (ФЭП) жиналуына жағдай жасайды, нәтижесінде қатерлі жасушалардың биомолекулалар синтезі үшін қолданылатын гликолиттік аралық заттардың жоғары концентрациясы қалады. Кейбір зерттеулер карциногенез процесінде PKM1 экспрессиясынан PKM2 экспрессиясына ауысу болатынын көрсетеді. Ісік микроортасы, мысалы гипоксия, PKM2 транскрипциясын стимуляциялау үшін гипоксияға бейімделетін факторлар сияқты транскрипция факторларын белсендіреді, бұл өз транскрипциясын күшейту үшін оң кері байланыс циклын құрайды.