Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
Күміс қосылыстарын түс беру үшін қолдану. Патологияда күміс бояу – гистологиялық кесінділердің микроскопиясында, температуралық градиентті гель электрофорезінде және полиакриламид гельдеріндегі нысананың сыртқы түрін таңдап өзгерту үшін күміс пайдалану әдісі. Дәстүрлі боялған шыныда күміс бояу – күміс қосылыстарынан (әсіресе күміс нитраты) тұратын қоспаны қосып, жеңіл қыздыру арқылы сарыдан қызғылт сарыға немесе қоңыр түстерді (немесе көк шыны негізінде жасыл түсті) алу тәсілі. Бұл әдіс 1800 жылдан кейін енгізілді және "боялған шыны" терминіндегі "бояу" деген сөзді білдіреді. Күміс қосылыстары байланыстыратын заттармен араластырылып, шыны бетіне жағылады, содан кейін пеште немесе қоршақта қыздырылады.
Using silver compounds to add colour
In pathology, silver staining is the use of silver to selectively alter the appearance of a target in microscopy of histological sections; in temperature gradient gel electrophoresis; and in polyacrylamide gels. In traditional stained glass, silver stain is a technique to produce yellow to orange or brown shades (or green on a blue glass base), by adding a mixture containing silver compounds (notably silver nitrate), and firing lightly. It was introduced soon after 1800, and is the "stain" in the term "stained glass". Silver compounds are mixed with binding substances, applied to the surface of glass, and then fired in a furnace or kiln.
Тарих
Камилло Голджи жүйке жүйесін зерттеу үшін күміс бояуды жетілдірді. Бұл процестің нақты химиялық механизмі белгісіз болғанымен, Голджи әдісі шектеулі сандағы жасушаларды толығымен, кездейсоқ түрде бояйды. Кереньи мен Галлиас күміс бояуды гельдегі ақуыздың өте аз мөлшерін анықтау үшін жоғары сезімтал әдіс ретінде ұсынды. Бұл техника басқа да биологиялық макромолекулаларды зерттеу үшін кеңейтілді, олар әртүрлі орталарда бөлінген. Классикалық Coomassie жарқын көк бояуы көбінесе 50 нг ақуыз жолағын анықтай алады; күміс бояу сезімталдықты әдетте 50 есеге арттырады. Түс интенсивтігіне көптеген айнымалылар әсер етеді және әрбір ақуыздың өзіне тән боялу қасиеттері болады; таза шыны ыдыстар, таза реагенттер және ең жоғары тазалықтағы су – сәтті бояудың кілті.
Camillo Golgi perfected silver staining for the study of the nervous system. Although the exact chemical mechanism by which this occurs is unknown, Golgi's method stains a limited number of cells at random in their entirety. Silver staining was introduced by Kerenyi and Gallyas as a sensitive procedure to detect trace amounts of proteins in gels. The technique has been extended to the study of other biological macromolecules that have been separated in a variety of supports. Classical Coomassie brilliant blue staining can usually detect a 50 ng protein band; silver staining increases the sensitivity typically 50 times. Many variables can influence the color intensity and every protein has its own staining characteristics; clean glassware, pure reagents, and water of highest purity are the key points to successful staining.
Химия
Кейбір жасушалар аргентафинді болып келеді. Олар формалинмен бекітілгеннен кейін күміс ерітіндісін металл күміске дейін тотықсыздандырады. Басқа жасушалар аргирофильді болып келеді. Бұл жасушалар гидрохинон немесе формалин сияқты тотықсыздандырғыш заттарды қамтитын бояуға ұшырағаннан кейін күміс ерітіндісін металл күміске дейін тотықсыздандырады. Күміс нитраты фосфат иондарымен ерімейтін күміс фосфатын түзетіндіктен, бұл әдіс Вон Косса бояуы деп аталады. Тотықсыздандырғыш заттың, әдетте гидрохинонның әсерінен қара элементар күміс пайда болады. Бұл сүйек өсу кезінде кальций фосфаты бөлшектерінің қалыптасуын зерттеу үшін қолданылады.
Some cells are argentaffin. These reduce silver solution to metallic silver after formalin fixation. Other cells are argyrophilic. These reduce silver solution to metallic silver after being exposed to the stain that contains a reductant, for example hydroquinone or formalin. Silver nitrate forms insoluble silver phosphate with phosphate ions; this method is known as the Von Kossa Stain. When subjected to a reducing agent, usually hydroquinone, it forms black elementary silver. This is used for study of formation of calcium phosphate particles during bone growth.
Гистологиялық сипаттама
Күміс бояу қызығушылық тудыратын нысаналарды – яғни ДНК және белоктар сияқты, жасуша ішіндегі және жасуша сыртындағы жасушалық компоненттерді, мысалы, III типті коллаген және ретикулин талшықтарын – нысаналарға металл күміс бөлшектерін орналастыру арқылы көруге мүмкіндік береді.
Silver staining aids the visualization of targets of interest, namely intracellular and extracellular cellular components such as DNA and proteins, such as type III collagen and reticulin fibres by the deposition of metallic silver particles on the targets of interest.
Диагностикалық микробиология
Псевдомонас, Легионелла, Лептоспира, H. pylori, Бартонелла және Трепонема, сондай-ақ Пневмоцистис, Криптококк және Кандида сияқты саңырауқұлақтар күміспен боялатын организмдер болып табылады.
Pseudomonas, Legionella, Leptospira, H. pylori, Bartonella and Treponema, and fungi such as Pneumocystis, Cryptococcus, and Candida are organisms that are stained with silver.
Кариотипті талдау
Күмiс бояу кариотипілеуде қолданылады. Күміс нитраты ядролық ұйым аймағымен (НОР) байланысты белокты бояп, күміс жиналатын қараңғы аймақты көрсетеді, бұл NOR ішіндегі рРНК гендерінің активтілігін анықтайды. Адамның 13, 14, 15, 21 және 22 хромосомаларында NOR бар, олар күміс бояу активтілігін кем дегенде 50 есеге арттырады.
Silver staining is used in karyotyping. Silver nitrate stains the nucleolar organization region (NOR) associated protein, producing a dark region wherein the silver is deposited and denoting the activity of rRNA genes within the NOR. Human chromosomes 13, 14, 15, 21, and 22 have NORs, which increase the silver stain activity by at least 50 times.
Геномдық және протеомдық талдау
Күміс бояу гельдерді бояу үшін қолданылады. Агороза гельіндегі ақуыздардың күміс бояуын 1973 жылы Керени мен Галлиас әзірледі. Кейіннен ол SDS PAGE-де қолданылатын және ДНК немесе РНК бояуға бейімделген полиакриламид гельдеріне де қолданылатын болды. Гликопротеиндер мен полисахаридтердің гликозилдеуін 4 °C температурада 0,1% периодикалық қышқылмен 1 сағатқа алдын ала өңдеу арқылы тотықтыруға болады, бұл күміс иондарының байланысын және бояу нәтижесін жақсартады. Алдымен, ақуыздар 10% сірке қышқылы мен 30% этанолдан тұратын бекіткіш ерітінді арқылы гельде денатурацияланып, тұншықтырылады, сонымен бірге жуғыш зат (көбінесе SDS) алынып тасталады. Осылайша, ақуыздардың таралуы айтарлықтай төмендейді. Сумен бірнеше рет жуғаннан кейін, гель күміс нитраты ерітіндісінде инкубацияланады. Күміс иондары ақуыздардың теріс зарядталған тізбектеріне байланады. Артық күміс иондары сумен жуылып алынады. Соңғы даму кезеңінде күміс иондары сілтілік формальдегид қосылуы арқылы элементар күміске дейін тотықтырылады. Бұл ақуыздардың орналасқан жерлерін қоңырдан қара түске дейін бояйды. Бояудың қарқындылығы ақуыздың бастапқы құрылысына байланысты. Сонымен қатар, қолданылатын ыдыстардың тазалығы мен реагенттердің тазалығы күміс бояудың нәтижесіне әсер етеді. Күміспен боялған гельдердегі жиі кездесетін артефактілер – электрофорезге дейін сынаманың ластануы салдарынан 54-57 кДа және 65-68 кДа диапазонындағы кератин жолақтары.
Silver staining is used to stain gels. The silver stain of proteins in Agarose gels was developed in 1973 by Kerenyi and Gallyas. Later it was adapted to polyacrylamide gels used in SDS PAGE, and also for staining DNA or RNA. The glycosylations of glycoproteins and polysaccharides can be oxidised by a 1 hour pre treatment with 0.1% periodic acid at 4 °C, which improves the binding of silver ions and the staining result. First, the proteins are denatured in the gel by a fixative solution of 10% acetic acid and 30% ethanol and precipitated, at the same time the detergent (mostly SDS) is extracted. The diffusion of the proteins is thus significantly reduced. After repeated washing with water, the gel is incubated in a silver nitrate solution. Silver ions bind to negatively charged side chains of the proteins. Excess silver ions are then washed off with water. In the final development step, the silver ions are reduced to elemental silver by addition of alkaline formaldehyde. This stains the sites where proteins are present, brown to black. The intensity of the staining depends on the primary structure of the protein. Furthermore, the cleanliness of the vessels used and the purity of the reagents influence the silver stain. Common artifacts in silver stained gels are bands of keratin in the ranges of 54 57 kDa and 65 68 kDa as a contamination of the sample prior to the electrophoresis.