Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Кіріспе
Гуанидиний тиоцианаты (GTC) немесе гуанидиний изотиоцианаты (GITC) – ақуызды денатурациялауға қолданылатын химиялық қосылыс, ол хаотроптық агент болып табылады, бірақ көбінесе жасушалардан ДНК және РНК бөліп алу кезінде нуклеин қышқылын қорғау үшін қолданылады. GITC гуанидин тиоцианаты деп те аталуы мүмкін. Себебі гуанидиний – гуанидиннің конугат қышқылы және гуанидиний катионы [CH6N3]+ деп белгіленеді.
Guanidinium thiocyanate (GTC) or guanidinium isothiocyanate (GITC) is a chemical compound used as a general protein denaturant, being a chaotropic agent, although it is most commonly used as a nucleic acid protector in the extraction of DNA and RNA from cells. GITC may also be recognized as guanidine thiocyanate. This is because guanidinium is the conjugate acid of guanidine and is called the guanidinium cation, [CH6N3]+.
Қолданылуы
Гуанидиний тиоцианаты вирусты, мысалы 1918 жылғы "испан тұмауын" қоздырған тұмау вирусын деактивациялау үшін қолдануға болады, осылайша оны қауіпсіз зерттеуге мүмкіндік туады. Гуанидиний тиоцианаты сондай-ақ РНК және ДНК экстракцияларында жасушалар мен вирус бөлшектерін лиздеуге пайдаланылады, онда оның лиздеу әрекетінен басқа функциясы – оларды денатурациялау арқылы RNase және DNase ферменттерінің активтілігін тежеу болып табылады. Әйтпесе, бұл ферменттер экстрактқа зиян келтіруі мүмкін. Көп қолданылатын әдіс – гуанидиний тиоцианаты фенол-хлороформ экстракциясы. РНК-ны Солтүстік блот немесе ДНК-ны Оңтүстік блот талдауы үшін бөліп алғанда фенол немесе хлороформды міндетті түрде қолданудың қажеті жоқ, себебі гель электрофорезі және мембранаға көшіру РНК/ДНК-ны ақуыздардан бөліп шығарады. Сонымен қатар, бұл әдістерде зондтар конъюгаттармен байланысқа түсетіндіктен, процестен өткен пептидтердің маңызы жоқ, егер пептид RNase немесе DNase болмаса, және фермент егер дұрыс хаттамалар сақталса, қайта құрылымдалуға жете қоймаса. Бір мүмкін ерекшелік – температуралық экстремофильдермен жұмыс істеген кезде болуы мүмкін, себебі осы организмдердің кейбір ферменттері ерекше жағдайларда тұрақты болып қалуы мүмкін.
Guanidinium thiocyanate can be used to deactivate a virus, such as the influenza virus that caused the 1918 "Spanish flu", so that it can be studied safely. Guanidinium thiocyanate is also used to lyse cells and virus particles in RNA and DNA extractions, where its function, in addition to its lysing action, is to prevent activity of RNase enzymes and DNase enzymes by denaturing them. These enzymes would otherwise damage the extract. A commonly used method is guanidinium thiocyanate phenol chloroform extraction. It is not strictly necessary to use phenol or chloroform if extracting RNA for Northern blotting or DNA for Southern blot analysis because the gel electrophoresis followed by transfer to a membrane will separate the RNA/DNA from the proteins. Additionally, since these methods use probes to bind to their conjugates, peptides that get through the process don't generally matter unless a peptide is an RNase or DNase, and then only if the enzyme manages to renature, which should not occur if proper protocols are followed. A possible exception might be when working with temperature extremophiles because some enzymes of these organisms can remain stable under extraordinary circumstances.