ДНК көбейту әдісі: Ішкі полимераза тізбектік реакциясы (nested PCR)
Nested polymerase chain reaction
Ішек PCR: ДНК-ны күшейту әдісі, қате нәтижелерді азайтады. ДНК анализ, генетикалық зерттеулер, криминалистикада қолданылады. ДНК полимераза, праймерлер туралы ақпарат.
Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
ДНК көшіру әдісі
Method of DNA replication
Ұялы полимераза тізбекті реакциясы (ҰПТР) – күтпеген праймерлердің байлану орындарының күшеюінен туындаған өнімдердегі қате байлануды азайту мақсатында жасалған полимераза тізбекті реакциясының түрі.
Nested polymerase chain reaction (nested PCR) is a modification of polymerase chain reaction intended to reduce non specific binding in products due to the amplification of unexpected primer binding sites.
Полимеразаның тізбекті реакциясы
Полимераза тізбекті реакциясы (ПТР) – бұл ДНҚ үлгілерін температура арқылы басқарылатын ДНҚ полимераза көмегімен күшейту процесі. Оның нәтижелерін тізбектеу немесе талдау үшін пайдалануға болады, және бұл процесс көптеген генетикалық зерттеу зертханаларындағы маңызды құрал, сондай-ақ сот-медициналық сараптамада және басқа да адам генетикасымен байланысты істерде ДНҚ саусақ іздерін анықтау үшін қолданылады. Дәстүрлі ПТР үшін мақсатты ДНҚ-ның екі шетіне толық сәйкес келетін праймерлер қажет. ПТР нәтижесінде алынатын өнімнің мөлшері реакцияға түсетін температуралық циклдар саны артықша болған сайын көбейеді. Жиі кездесетін мәселе – праймерлердің ДНҚ-ның қате аймақтарына байланысып, күтпеген өнімдерді тудыруы. Бұл мәселе ПТР циклдарының саны артқан сайын одан да жиі кездеседі.
Polymerase chain reaction itself is the process used to amplify DNA samples, via a temperature mediated DNA polymerase. The products can be used for sequencing or analysis, and this process is a key part of many genetics research laboratories, along with uses in DNA fingerprinting for forensics and other human genetic cases. Conventional PCR requires primers complementary to the termini of the target DNA. The amount of product from the PCR increases with the number of temperature cycles that the reaction is subjected to. A commonly occurring problem is primers binding to incorrect regions of the DNA, giving unexpected products. This problem becomes more likely with an increased number of cycles of PCR.
Бастауыштар
Ұялы полимераза тізбекті реакциясы (ПТР) полимераза тізбекті реакциясының екі кезегінде қолданылатын екі жиын праймерлерді қамтиды. Екінші жиын праймерлер бірінші кезектің өніміндегі екінші мақсатты күшейтуге арналған. Бұл бірінші кезеңде аз циклдарда күшейтуге мүмкіндік береді, артық емес өнімдердің пайда болуын шектейді. Екінші ұялы праймер жиынтығы бірінші күшейту кезегінен алынған қана мақсатты өнімді күшейтуге тиіс, ал артық емес өнімді күшейте алмайды. Бұл жалғы артық емес өнімдерді азайта отырып, циклдардың жалпы санын көбейтуге мүмкіндік береді. Бұл сирек кездесетін үлгілерге немесе жоғары фондық ПТР үшін пайдалы.
Nested polymerase chain reaction involves two sets of primers, used in two successive runs of polymerase chain reaction, the second set intended to amplify a secondary target within the first run product. This allows amplification for a low number of runs in the first round, limiting non specific products. The second nested primer set should only amplify the intended product from the first round of amplification and not non specific product. This allows running more total cycles while minimizing non specific products. This is useful for rare templates or PCR with high background.
Процестер
Нысаналы ДНК полимераза тізбекті реакциясының бірінші кезеңінен көк түсті праймерлердің бірінші жиынтығымен өтеді. Балама және ұқсас праймерлердің байланысу орындарын таңдау нәтижесінде әртүрлі өнімдер пайда болады, олардың тек біреуі қажетті тізбекті қамтиды. Бірінші реакциядан алынған өнім, қызыл түсті праймерлердің екінші жиынтығымен екінші рет тізбекті реакциядан өтеді. Қажетсіз ПТР өнімдерінің ешқайсысында жаңа праймерлердің екеуіне де байланысу орындарының болуы өте төмен, бұл екінші ПТР өнімінің қажетсіз өнімдермен аз ластануын қамтамасыз етеді.
The target DNA undergoes the first run of polymerase chain reaction with the first set of primers, shown in green. The selection of alternative and similar primer binding sites gives a selection of products, only one containing the intended sequence. The product from the first reaction undergoes a second run with the second set of primers, shown in red. It is very unlikely that any of the unwanted PCR products contain binding sites for both the new primers, ensuring the product from the second PCR has little contamination from unwanted products.