Введение

Флуоресцеиновый изотиоцианат (FITC) является производным флуоресцеина, используемым в широком спектре применений, включая проточную цитометрию. Впервые описанный в 1942 году, FITC представляет собой оригинальную молекулу флуоресцеина, функционализированную реактивной группой изотиоцианата (−N=C=S), замещающей атом водорода в нижнем кольце структуры. Обычно он доступен в виде смеси изомеров – флуоресцеина 5-изотиоцианата (5 FITC) и флуоресцеина 6-изотиоцианата (6 FITC). FITC реагирует с нуклеофилами, включая амино- и сульфгидрильные группы белков. Он был синтезирован Робертом Сейвальдом и Джозефом Буркхальтером в 1958 году. Функциональная группа сукцинимидилового эфира, присоединенная к ядру флуоресцеина с образованием "NHS-флуоресцеина", представляет собой еще одно распространенное производное, реактивное по отношению к аминам, обладающее гораздо большей специфичностью к первичным аминам в присутствии других нуклеофилов. FITC имеет пиковые длины волн возбуждения и излучения примерно 495 нм и 519 нм, что придает ему зеленый цвет. Как и большинство фторхромов, он склонен к фотообесцвечиванию. В связи с проблемой фотообесцвечивания производные флуоресцеина, такие как Alexa 488 и DyLight 488, были разработаны для различных химических и биологических применений, где требуется большая фотостабильность, более высокая интенсивность флуоресценции или различные группы для присоединения. Кроме того, в некоторых экспериментах используют склонность FITC к фотообесцвечиванию для измерения латеральной подвижности белков в мембранах с помощью метода восстановления флуоресценции после фотообесцвечивания.