Введение

Техника инженерии белков
Дисплей дрожжей (или дисплей на поверхности дрожжей) — это метод инженерии белков, использующий экспрессию рекомбинантных белков, встроенных в клеточную стенку дрожжей. Этот метод может применяться для различных задач, таких как выделение и модификация антител, а также изучение взаимодействия микроорганизмов с клетками-хозяевами.

Разработка

Метод дрожжевого дисплея был впервые опубликован лабораторией профессора К. Дэна Виттрупа и Эрика Т. Бодера. Технология была продана компании Abbott Laboratories в 2001 году.

Как это работает

Интересующий белок отображается в виде слияния с белком Aga2p на поверхности дрожжей. Белок Aga2p используется дрожжами для опосредования контактов между клетками во время слияния клеток дрожжей. Следовательно, отображение белка через Aga2p, вероятно, обеспечивает экспозицию белка слияния с поверхности клетки, минимизируя потенциальные взаимодействия с другими молекулами на клеточной стенке дрожжей. Использование магнитной сепарации и проточной цитометрии в сочетании с библиотекой дрожжевого дисплея может быть высокоэффективным методом для выделения белковых лигандов с высокой аффинностью к практически любому рецептору посредством направленной эволюции.

Преимущества и недостатки

Преимущества дисплея на дрожжах по сравнению с другими методами эволюции in vitro включают эукариотическую экспрессию и посттрансляционную обработку, механизмы контроля качества секреторного пути эукариот, минимальные эффекты авидности и количественный скрининг библиотек с помощью проточной цитометрии с флуоресцентной активацией клеток (FACS). Дрожжи – это эукариотические организмы, позволяющие проводить сложные посттрансляционные модификации белков, недоступные для других библиотек дисплея. К недостаткам относятся меньшие размеры мутантных библиотек по сравнению с альтернативными методами и отличная гликозилировка в дрожжах по сравнению с клетками млекопитающих. Альтернативные методы эволюции белков in vitro – дисплей на клетках млекопитающих, дисплей фагов, дисплей рибосом, дисплей на бактериях и дисплей мРНК.