Гистологиялық бояу әдісі: Трихромды бояу – тіндерді үш түрлі түске бөліп, микроскопта жақсы көрінуін қамтамасыз етеді. Эритроциттер, бұлшық ет, коллагенді анықтауға көмектеседі.
Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
Гистологиялық бояу әдісі
Histological staining method
Трихромдық бояу – екі немесе одан көп қышқыл бояуларды полиқышқылмен бірге қолданатын гистологиялық бояу әдісі. Бояу тіндерді контрастты түстерге бояу арқылы оларды ерекшелендіреді. Бұл жасушалар мен тіндердің микроскоптық ерекшеліктерінің контрасттылығын арттырады, оларды микроскоп арқылы қарағанда анық көруге мүмкіндік береді. Трихром сөзі "үш түс" дегенді білдіреді. "Трихром" деп алғаш рет сипатталған бояу протоколы – Mallory's trichrome бояуы, ол эритроциттерді қызыл, бұлшықет тінін қызыл, ал коллагенді көк түске бояды. Басқа трихромдық бояу протоколдары: Masson's trichrome бояуы, Lillie's trichrome және Gömöri trichrome бояуы.
Trichrome staining is a histological staining method that uses two or more acid dyes in conjunction with a polyacid. Staining differentiates tissues by tinting them in contrasting colours. It increases the contrast of microscopic features in cells and tissues, which makes them easier to see when viewed through a microscope. The word trichrome means "three colours". The first staining protocol that was described as "trichrome" was Mallory's trichrome stain, which differentially stained erythrocytes to a red colour, muscle tissue to a red colour, and collagen to a blue colour. Some other trichrome staining protocols are the Masson's trichrome stain, Lillie's trichrome, and the Gömöri trichrome stain.
Мақсаты
Трихромды бояусыз бір ерекшелікті екіншісінен ажырату өте қиын. Мысалы, тегіс бұлшық етті коллагеннен ажырату қиын. Трихромды бояу бұлшық етті қызыл, ал коллаген талшықтарын жасыл немесе көк түске бояуға мүмкіндік береді. Бауыр биопсиясында бауыр жасушаларының арасында жіңішке коллаген талшықтары болуы мүмкін, ал коллаген мөлшері бояу әдісіне сүйеніп бағалануы мүмкін. Трихромды әдістер қазір бұлшық етті коллагеннен, гипофиздің альфа-жасушаларын бета-жасушаларынан, фибринді коллагеннен және жаңадан мұздатылған бұлшық ет тіндеріндегі митохондрияларды ажырату үшін қолданылады. Ол бауыр циррозы сияқты коллагенді тіндердің (яғни фиброздық өзгерістердің) көбеюін анықтауға және бұлшық ет жасушалары мен фибробластардан туындаған ісіктерді ажыратуға көмектеседі.
Without trichrome staining, discerning one feature from another can be extremely difficult. Smooth muscle tissue, for example, is hard to differentiate from collagen. A trichrome stain can colour the muscle tissue red, and the collagen fibres green or blue. Liver biopsies may have fine collagen fibres between the liver cells, and the amount of collagen may be estimated based on the staining method. Trichrome methods are now used for differentiating muscle from collagen, pituitary alpha cells from beta cells, fibrin from collagen, and mitochondria in fresh frozen muscle sections, among other applications. It helps in identifying increases in collagenous tissue (i. e., fibrotic changes) such as in liver cirrhosis and distinguishing tumours arising from muscle cells and fibroblasts.
Процедура
Трихромды бояу әдістері екі немесе одан көп қышқыл бояуды қолданады. Әдетте қышқыл бояулар бірдей негізгі белоктарды бояйды, бірақ оларды тізбектеп қолдану арқылы бояу үлгісін өзгертуге болады. Бояуды таңдап алу үшін поликислота (мысалы, фосфомолибд қышқылы немесе вольфрамфосфор қышқылы) қолданылады. Поликислоталардың жоғары молекулалық салмағы бар бояулар сияқты әрекет ететіні ескеріледі: олар коллагеннен оңай алынатын бояуды ығыстырып шығарады. Әдетте, барлық компоненттерді артық бояу үшін алдымен сұйылтылған сірке қышқылындағы қызыл бояу қолданылады. Содан кейін коллагеннен және басқа да компоненттерден қызыл бояуды ығыстыру үшін поликислота қолданылады. Екінші қышқыл бояу (көк немесе жасыл) сұйылтылған сірке қышқылында қолданылады, ол өз кезегінде поликислотаны ығыстырып, бастапқыда қолданылған бояуға қарама-қарсы түсті коллагенге әкеледі. Егер эритроциттерді бояу қажет болса, қызыл бояумен бояу алдында кішкентай молекулалық сары немесе қызғылт сары бояу қолданылады. Ол әдетте 80% этанолдағы қаныққан ерітіндіден қолданылады және көбінесе пикрин қышқылымен (өзі бояғыш) және поликислотамен бірге қолданылады. Бұл әдістер тіндердің бояуларға реакциясындағы, тығыздығындағы, қолжетімділігіндегі және т.б. шағын айырмашылықтарды пайдаланады. Бояулар мен поликислоталар тізбектеп қолданылатын трихромды бояулар көп қадамды трихромдар деп аталады. "Бір қадамды" әдістерде барлық бояулар (поликислотасы бар немесе жоқ) бір ерітіндіде біріктіріледі. Трихромды бояудың ең көне бір қадамды тәсілдерінің бірі – ван Гисон әдісі, ол бұлшықет пен цитоплазманы сары, ал коллагенді қызыл түске бояйды. Тағы бір мысал – Массон трихромын жақсы имитациялайтын Гомери трихромы. "Сары еріту" әдісінде алдымен сұйылтылған сірке қышқылындағы қызыл бояу қолданылады, содан кейін бөлім мұқият кептіріліп, ылғалдың қалмауы қамтамасыз етіледі. Содан кейін қызыл бояу еріткіштегі сары бояумен ығыстырылады, мысалы, целлозол (2-этоксиэтанол). Yellowsolve атауы "сары" және "целлозол" терминдерінің қосылуынан пайда болған. Лендрумның флоксин тартразині – жасушалық инклюзиялар үшін сары еріту бояуының бір мысалы.
Trichrome staining techniques employ two or more acid dyes. Normally acid dyes would stain the same basic proteins, but by applying them sequentially the staining pattern can be manipulated. A polyacid (such as phosphomolybdic acid or tungstophosphoric acid) is used to remove dye selectively. Polyacids are thought to behave as dyes with a high molecular weight: they displace easily removed dye from collagen. Usually a red dye in dilute acetic acid is applied first to overstain all components. Then a polyacid is applied to remove the red dye from collagen and some other components by displacement. A second acid dye (blue or green) in dilute acetic acid is applied which, in turn, displaces the polyacid, resulting in collagen stained in a contrasting colour to the initial dye used. If erythrocytes are to be stained, a small molecular weight yellow or orange dye is applied before staining with the red dye. It is usually applied from a saturated solution in 80% ethanol and often in conjunction with picric acid (itself a dye) and a polyacid. The methods exploit minor differences in tissue reaction to dyes, density, accessibility and so on. Trichrome stains in which dyes and a polyacid are applied sequentially are called multi step trichromes. In "one step" methods, all the dyes—with or without a polyacid—are combined in a single solution. One of the oldest single step approaches to trichrome staining is van Gieson's method, which stains muscle and cytoplasm yellow, and collagen red. Another is the Gömöri trichrome stain, which closely mimics Masson's trichrome. In "yellowsolve" methods, a red dye in dilute acetic acid is first applied, then the section is very thoroughly dehydrated to ensure that no moisture remains. The red dye is then displaced by a yellow dye in a solvent, such as cellosolve (2 ethoxy ethanol). The name yellowsolve is a blend of the terms yellow and cellosolve. Lendrum's phloxine tartrazine for cell inclusions is one example of a yellowsolve stain.