Кіріспе
Буферлік ерітінді
TAE буфері – Tris негізі, сірке қышқылы және EDTA қоспасын қамтитын буферлік ерітінді. Молекулалық биологияда, ДНК және РНК сияқты нуклеин қышқылдарын бөлу үшін агароза электрофорезінде қолданылады. Ол әдетте pH 8,3-тегі Tris ацетат буферінен және еківалентті катиондарды байланыстыратын EDTA-дан тұрады. TAE буферлік сыйымдылығы TBE-ге қарағанда төмендеу келеді және тез тозуы мүмкін, бірақ TAE-да екі тізбекті, тік сызықты ДНК жылдам қозғалады. Алдыңғыда Brody & Kern электрофоретикалық буферлерді гельдік жүйелерде тиімдірек және арзан өткізгіш ортамен алмастыру арқылы жеңілдеткен, TBE және TAE буферлерін пайдаланған.
TAE buffer is a buffer solution containing a mixture of Tris base, acetic acid and EDTA. In molecular biology, it is used in agarose electrophoresis typically for the separation of nucleic acids such as DNA and RNA. It is made up of Tris acetate buffer, usually at pH 8.3, and EDTA, which sequesters divalent cations. TAE has a lower buffer capacity than TBE and can easily become exhausted, but linear, double stranded DNA runs faster in TAE. Previously, Brody & Kern simplified electrophoretic buffers by substituting TBE and TAE buffers for a more efficient and inexpensive conductive media in gel systems.
Қолданылуы
ТАЭ (Трис ацетат EDTA) буфері жұмыс буфері ретінде де, агароза гельдерінде де қолданылады. Оның кең ауқымды мутациялық талдау үшін денатұрлау градиенттік гель электрофорезі әдістерінде қолданылуы да сипатталған. ТАЭ әртүрлі концентрацияларда натрий хлоридінің болуымен және болмауымен ерітіндідегі ДНК-ның жылдамдығын зерттеу үшін пайдаланылды. Дегенмен, ДНК үлгісінде натрий хлоридінің (және көптеген басқа тұздардың) жоғары концентрациясы оның жылдамдығын төмендетеді. Бұл нәтижедегі ДНК жолақтық суретін дұрыс түсіндіруге кедергі келтіруі мүмкін.
Дайындық
ТАЭ буфері әдетте зертханалық қолдануға арналған 50x қосалқы ерітінді ретінде дайындалады. 50x қосалқы ерітіндісін 242 г Tris негізін суда ерітіп, 57,1 мл мұздық сірке қышқылы мен 100 мл 500 мМ EDTA (pH 8,0) ерітіндісін қосып, соңғы көлемді 1 литрге дейін жеткізуге болады. Бұл негізгі ерітінді 49:1 мөлшерінде сумен сұйытылып, 1× жұмыс ерітіндісі алынады. Бұл 1× ерітіндіде 40 мМ Tris, 20 мМ сірке қышқылы және 1 мМ EDTA болады. № Атауы 1 мольге 50x ерітінді 50× 1× ерітінді 1X 1 Tris негіз 121,1 г/л 2 М 242,2 г/л 40 мМ 4,844 г/л 2 Сірке қышқылы 57,1 мл/л 1 М 57,1 мл/л 20 мМ 1,21 мл/л 3 EDTA динатрий тұзы дигидраты 372,24 г/л 50 мМ 18,612 г/л 1 мМ 0,372 г/л 2 М = 2000 мМ, демек 2000 мМ / 50 = 40 мМ 1× үшін. 1 М = 1000 мМ, демек 1000 мМ / 50 = 20 мМ 1× үшін. 50 мМ / 50 = 1 мМ 1× үшін. Біріншіден, осы ингредиенттерді 500 мл ерітіп, содан кейін 1000 мл-ге дейін толтыру керек. Ескерту: EDTA еріу үшін көбірек уақыт қажет, сондықтан EDTA-ны еріткенде магниттік араластырғышты пайдаланыңыз (EDTA-ның аз мөлшерін 3 немесе 4 рет қосыңыз). 50× ТАЭ буферін дайындау әдісінің қадамдық рецепті protocols.io сайтында қолжетімді.
2 M = 2000 mM so 2000 mM /50 = 40 mM for 1×. 1M = 1000 mM so 1000 mM /50 = 20 mM for 1×. 50 mM /50 = 1 mM for 1×. First of all, these ingredients should be dissolved in 500 ml, then made up to 1000 ml. Note: EDTA will take more time to dissolve, so while dissolving EDTA use magnetic stirrer (few amounts of EDTA in 3 or 4 times). A step by step recipe of the preparation method for 50× TAE buffer is available on protocols. io.