ДНҚ және РНҚ тазалау әдісі: Фенолмен экстракциялау
Phenol extraction
ДНҚ және РНҚ тазалау әдісі: фенол экстракциясы – жасуша лизаттарынан нуклеин қышқылын тазалаудың тиімді тәсілі. Химия, биология, медицинада қолданылады.
Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Кіріспе
ДНК және РНҚ тазалау процедурасы
DNA and RNA purification procedure
Фенолды экстракция – бұл фенол ерітіндісін қолдана отырып, нуклеин қышқылы үлгілерін тазартатын зертханалық әдіс. Фенол, оның қасиеттері нуклеин қышқылын тиімді түрде бөліп алуға мүмкіндік беретіндіктен, экстракцияда жиі қолданылатын реагент болып табылады, әсіресе ол ақуыздарды күшті денатурациялайды, нуклеин қышқылын сақтайды және суда араласпайды. Бұл сонымен қатар, көмір шары сияқты шикізаттардан фенолдарды бөліп алу және оқшаулау процесін де білдіруі мүмкін. Бұл тазартылған фенолдар көптеген өнеркәсіптік және медициналық қосылыстарда қолданылады және кейбір синтез реакцияларында алдынғы зат ретінде пайдаланылады.
Phenol extraction is a laboratory technique that purifies nucleic acid samples using a phenol solution. Phenol is common reagent in extraction because its properties allow for effective nucleic acid extraction, particularly as it strongly denatures proteins, it is a nucleic acid preservative, and it is immiscible in water. It may also refer to the process of extracting and isolating phenols from raw materials such as coal tar. These purified phenols are used in many industrial and medical compounds and are used as precursors in some synthesis reactions.
Нуклеин қышқылдарын фенолмен экстракциялау
Фенолдық экстракция – жасуша лизаттарынан нуклеин қышқылы үлгілерін тазарту үшін кеңінен қолданылатын әдіс. Нуклеин қышқылын алу үшін жасушаны лиздеу және оны басқа жасуша компоненттерінен бөліп алу қажет. Фенол – судан тығыздығы жоғары полярлы зат (1,07 г/см³ судың 1,00 г/см³-мен салыстырғанда). Судағы фенол ерітіндісіне салғанда, денатурацияланған ақуыздар мен жасушаның қажетсіз компоненттері фенолда ериді, ал полярлы нуклеин қышқылы су фазасында ериді. Содан кейін ерітіндіні центрифугалау арқылы фенол мен су органикалық және сулы фазаларға бөлінеді. Тазартылған нуклеин қышқылын ерітіндінің сулы фазасынан тұндыруға болады. Фенол көбінесе хлороформпен бірге қолданылады. Хлороформ мен фенолдың тең көлемін қосу сулы және органикалық фазалардың анық бөлінуін қамтамасыз етеді. Хлороформ мен фенол араласып, фенолдан тығыз ерітінді жасайды, бұл органикалық және сулы қабаттарды бөлуге көмектеседі. Хлороформ қосымы тазартылған нуклеин қышқылы үлгісін алу үшін сулы фазаны алып тастағанда тиімді. Ерітіндінің pH деңгейі әрбір экстракция түріне қарай реттелуі керек. ДНК экстракциясы үшін pH 7,0–8,0-ға реттеледі. РНҚ-ны бөлек экстракциялау үшін pH 4,5-ке келтіріледі. pH 4,5 кезінде сутек иондары фосфат топтарының теріс зарядтарын бейтараптайды, нәтижесінде ДНК органикалық фазада ериді, ал РНҚ сулы фазада бөлек оқшауланады.
Phenol extraction is a widely used technique for purifying nucleic acid samples from cell lysates. To obtain nucleic acids, the cell must be lysed, and the nucleic acids separated from other cell components. Phenol is a polar substance with a higher density than water (1.07 g/cm3 compared to water's 1.00 g/cm3). When suspended in a water phenol solution, denatured proteins and unwanted cell components dissolve in the phenol, while polar nucleic acids dissolve in the water phase. The solution may then be centrifuged to separate the phenol and water into distinct organic and aqueous phases. Purified nucleic acids can be precipitated from the aqueous phase of the solution. Phenol is often used in combination with chloroform. Adding an equal volume of chloroform and phenol ensures a distinct separation between the aqueous and organic phases. Chloroform and phenol are miscible and create a denser solution than phenol alone, aiding the separation of the organic and aqueous layers. This addition of chloroform is useful when removing the aqueous phase to obtain a purified nucleic acid sample. The pH of the solution must be adjusted specifically for each type of extraction. For DNA extraction, the pH is adjusted to 7.0–8.0. For RNA specific extraction, the pH is adjusted to 4.5. At pH 4.5, hydrogen ions neutralize the negative charges on the phosphate groups, causing DNA to dissolve in the organic phase while allowing RNA to be isolated separately in the aqueous phase.