Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.
Введение
Процедура очистки ДНК и РНК
DNA and RNA purification procedure
Фенольная экстракция – это лабораторный метод очистки образцов нуклеиновых кислот с использованием раствора фенола. Фенол является распространенным реагентом в экстракции благодаря своим свойствам, обеспечивающим эффективное выделение нуклеиновых кислот, в частности, его способности сильно денатурировать белки, сохранять нуклеиновые кислоты и несмешиваемости с водой. Этот термин может также относиться к процессу извлечения и выделения фенолов из сырья, такого как каменноугольная смола. Полученные таким образом очищенные фенолы используются в различных промышленных и медицинских соединениях и служат прекурсорами в некоторых реакциях синтеза.
Phenol extraction is a laboratory technique that purifies nucleic acid samples using a phenol solution. Phenol is common reagent in extraction because its properties allow for effective nucleic acid extraction, particularly as it strongly denatures proteins, it is a nucleic acid preservative, and it is immiscible in water. It may also refer to the process of extracting and isolating phenols from raw materials such as coal tar. These purified phenols are used in many industrial and medical compounds and are used as precursors in some synthesis reactions.
Фенольная экстракция нуклеиновых кислот
Фенольная экстракция — широко используемый метод очистки образцов нуклеиновых кислот из клеточных лизатов. Для получения нуклеиновых кислот клетку необходимо лизировать и отделить нуклеиновые кислоты от других клеточных компонентов. Фенол — полярное вещество с плотностью выше, чем у воды (1,07 г/см³ по сравнению с 1,00 г/см³ воды). При суспендировании в водном растворе фенола денатурированные белки и нежелательные клеточные компоненты растворяются в феноле, а полярные нуклеиновые кислоты — в водной фазе. Затем раствор центрифугируют для разделения фенола и воды на отдельные органическую и водную фазы. Очищенные нуклеиновые кислоты можно осадить из водной фазы раствора. Фенол часто используется в сочетании с хлороформом. Добавление равного объема хлороформа и фенола обеспечивает четкое разделение между водной и органической фазами. Хлороформ и фенол смешиваются, образуя более плотный раствор, чем фенол сам по себе, что облегчает разделение органического и водного слоев. Это добавление хлороформа полезно при извлечении водной фазы для получения очищенного образца нуклеиновой кислоты. pH раствора необходимо корректировать в зависимости от типа экстракции. Для экстракции ДНК pH регулируют до 7,0–8,0. Для специфической экстракции РНК pH регулируют до 4,5. При pH 4,5 ионы водорода нейтрализуют отрицательные заряды на фосфатных группах, что приводит к растворению ДНК в органической фазе, а РНК остается изолированной в водной фазе.
Phenol extraction is a widely used technique for purifying nucleic acid samples from cell lysates. To obtain nucleic acids, the cell must be lysed, and the nucleic acids separated from other cell components. Phenol is a polar substance with a higher density than water (1.07 g/cm3 compared to water's 1.00 g/cm3). When suspended in a water phenol solution, denatured proteins and unwanted cell components dissolve in the phenol, while polar nucleic acids dissolve in the water phase. The solution may then be centrifuged to separate the phenol and water into distinct organic and aqueous phases. Purified nucleic acids can be precipitated from the aqueous phase of the solution. Phenol is often used in combination with chloroform. Adding an equal volume of chloroform and phenol ensures a distinct separation between the aqueous and organic phases. Chloroform and phenol are miscible and create a denser solution than phenol alone, aiding the separation of the organic and aqueous layers. This addition of chloroform is useful when removing the aqueous phase to obtain a purified nucleic acid sample. The pH of the solution must be adjusted specifically for each type of extraction. For DNA extraction, the pH is adjusted to 7.0–8.0. For RNA specific extraction, the pH is adjusted to 4.5. At pH 4.5, hydrogen ions neutralize the negative charges on the phosphate groups, causing DNA to dissolve in the organic phase while allowing RNA to be isolated separately in the aqueous phase.