Кіріспе
Биохимиялық зертханалық әдіс. Лоури ақуыздық сынағы – ерітіндідегі ақуыздың жалпы мөлшерін анықтауға арналған биохимиялық сынақ. Ақуыз концентрациясына пропорционалды түрде үлгі ерітіндісінің түсі өзгеруі арқылы ақуыздың жалпы концентрациясы көрінеді, оны колориметриялық әдістермен өлшеуге болады. Бұл сынақ биохимик Оливер Х. Лоуридің құрметіне аталған, ол 1940 жылдары бұл реагентті жасаған. Оның 1951 жылғы мақаласы, бұл әдісті сипаттайды, ғылыми әдебиеттегі ең көп сілтемеленген мақала болып табылады, ол 300 000-нан астам рет сілтемеленген.
The Lowry protein assay is a biochemical assay for determining the total level of protein in a solution. The total protein concentration is exhibited by a color change of the sample solution in proportion to protein concentration, which can then be measured using colorimetric techniques. It is named for the biochemist Oliver H. Lowry who developed the reagent in the 1940s. His 1951 paper describing the technique is the most highly cited paper ever in the scientific literature, cited over 300,000 times.
Механизм
Әдіс мыс иондарының сілтілік жағдайларда пептидтік байланыстармен реакцияларын (Биурет сынағы) хош иісті ақуыз қалдықтарының тотығуымен үйлестіреді. Лоури әдісі пептидтік байланыстардың тотығуынан пайда болатын Cu+ ионының Фолин-Циокалтеу реагентімен (Фолин-Циокалтеу реакциясындағы фосфотунгистік қышқыл мен фосфомолибд қышқылының қоспасы) реакциясына негізделген. Реакция механизмі толыққанды түсіндірілмеген, бірақ Фолин-Циокалтеу реагентінің тотығуын және хош иісті қалдықтардың (негізінен триптофан, сондай-ақ тирозин) тотығуын қамтиды. Фолин реагентімен жұмыс істегенде, ол қышқыл жағдайда ғана белсенді болатындықтан, сақтық таныту қажет. Бұл рас болғанымен, бұрын айтылғандай, тотығу реакциясы тек pH 10 негіздік ортада жүреді. Сондықтан, реагент ыдырамай тұрып, тотығу реакциясы болуы керек. Фолин реагентін қосатын уақытта ақуыз ерітіндісін араластыру реакцияның қажетті бағытта өтуін қамтамасыз етеді. Эксперименттер цистеиннің де реагентке реакцияға түсетінін көрсетті. Демек, ақуыздағы цистеин қалдықтары да Лоури әдісінде байқалатын сіңіруге үлес қосады. Бұл реакцияның нәтижесінде гетерополимолибден көгі деп аталатын қарқынды көк түсті молекула пайда болады. Тотыққан Фолин реагентінің (гетерополимолибден көгі) концентрациясы 660 нм толқын ұзындығында сіңіру арқылы өлшенеді. Осыған байланысты, үлгідегі ақуыздың жалпы концентрациясын Фолин-Циокалтеу реагентін тотықтыратын триптофан мен тирозин қалдықтарының концентрациясынан анықтауға болады. Бұл әдіс алғаш рет 1951 жылы Лоури ұсынған. Бицинхонин қышқылы әдісі және Хартри-Лоури әдісі – бастапқы Лоури әдісінің кейінгі өзгертілген түрлері.