Введение

Анализ с помощью DNase – это метод ДНК-отпечатков, используемый в молекулярной биологии и биохимии, для выявления взаимодействия белка с ДНК, основанный на том, что белок, связанный с ДНК, часто защищает эту ДНК от ферментативного расщепления. Это позволяет локализовать участок связывания белка на конкретной молекуле ДНК. В методе используется фермент дезоксирибонуклеаза (DNase) для разрезания радиоактивно меченной на конце ДНК, после чего проводится гель-электрофорез для определения полученного рисунка расщепления. Например, интересующий фрагмент ДНК может быть амплифицирован методом ПЦР с использованием 32P-меченного праймера 5', в результате чего образуется множество молекул ДНК с радиоактивной меткой на одном конце одной из цепей двухцепочечной молекулы. Расщепление DNase приводит к образованию фрагментов. Фрагменты, меньшие по размеру относительно 32P-меченного конца, будут располагаться дальше по гелю, чем более крупные фрагменты. Затем гель используется для экспонирования специальной фотопленки. Рисунок расщепления ДНК в отсутствие белка, связывающего ДНК (обычно называемого свободной ДНК), сравнивается с рисунком расщепления ДНК в присутствии белка, связывающего ДНК. Если белок связывается с ДНК, участок связывания защищается от ферментативного расщепления. Эта защита проявляется в виде светлой области на геле, называемой "отпечатком". Варьируя концентрацию белка, связывающего ДНК, можно оценить его аффинность связывания, исходя из минимальной концентрации белка, при которой наблюдается отпечаток. Эта методика была разработана Дэвидом Дж. Галасом и Альбертом Шмицем в Женеве в 1977 году.