Введение
Класс бактериальных белков
Коагуляза – это белковый фермент, продуцируемый несколькими микроорганизмами, который обеспечивает превращение фибриногена в фибрин. В лаборатории он используется для дифференциации различных изолятов Staphylococcus. Важно отметить, что S. aureus обычно коагулязоположителен, что означает, что положительный тест на коагулязу указывает на наличие S. aureus или любого из других 11 коагулязоположительных стафилококков. Отрицательный тест на коагулязу, напротив, свидетельствует о наличии коагулязоотрицательных организмов, таких как S. epidermidis или S. saprophyticus. Однако сейчас известно, что не все S. aureus являются коагулязоположительными. В то время как коагулязоположительные стафилококки обычно патогенны, коагулязоотрицательные стафилококки чаще ассоциируются с оппортунистическими инфекциями. Его также продуцирует Yersinia pestis. Коагуляза взаимодействует с протромбином в крови. Образующийся комплекс называется стафилотромбином, который позволяет ферменту выступать в качестве протеазы для превращения фибриногена – белка плазмы, вырабатываемого печенью – в фибрин. Это приводит к свертыванию крови. Коагуляза прочно связана с поверхностью бактерии S. aureus и может покрывать ее поверхность фибрином при контакте с кровью. Фибриновый сгусток может защитить бактерию от фагоцитоза и изолировать ее от других защитных механизмов организма. Таким образом, фибриновая оболочка может повысить вирулентность бактерий. Связанная коагуляза является частью более крупного семейства адгезинных белков MSCRAMM.
Тест на свертываемость
Традиционно коагулазный тест использовался для дифференциации Staphylococcus aureus от коагулязонегативных стафилококков. S. aureus продуцирует две формы коагулазы (то есть связанную и свободную коагулазу). Связанная коагулаза, также известная как "фактор слипания", может быть обнаружена при проведении реакции коагуляции на стекле, а свободная коагулаза – при проведении реакции коагуляции в пробирке.
Пробный слайд
Для исключения аутоагглютинации проводится тест коагулазы на слайде с отрицательным контролем. Две капли физиологического раствора помещают на слайд, на котором указаны номер образца, тест (T) и контроль (C). Обе капли физиологического раствора эмульгируют с исследуемым микроорганизмом с помощью петли, прямой проволоки или деревянной палочки. Каплю плазмы (рекомендуется кроличья плазма, антикоагулированная ЭДТА) помещают на каплю физиологического раствора, соответствующую тесту, и тщательно перемешивают, затем слайд мягко покачивают в течение примерно 10 секунд. При ‘положительном’ результате в течение 10 секунд в плазме наблюдается макроскопическое помутнение, а в капле физиологического раствора – нет. При ‘отрицательном’ результате помутнения не наблюдается. Если тест коагулазы на слайде отрицательный, для подтверждения следует провести тест в пробирке. Помутнение в обеих каплях указывает на аутоагглютинацию, поэтому необходимо провести тест в пробирке. Тест в пробирке не проводится во всех учреждениях, но большинство результатов основано на посевах крови из лаборатории.
Испытание трубкой
В пробирке используется плазма кролика, инокулированная колонией стафилококков (то есть грамположительных кокков, которые являются каталазоположительными). Затем пробирку инкубируют при 37 °C в течение 1,5 часов. Если результат отрицательный, инкубацию продолжают до 18 часов. Если "положительный" (например, подозрительная колония – S. aureus), плазма свернется, в результате чего образуется сгусток (иногда сгусток настолько выражен, что жидкость полностью затвердевает). Если "отрицательный", плазма остается жидкой. Отрицательный результат может быть вызван S. epidermidis, но только более детальный идентификационный тест может это подтвердить, используя биохимические тесты, как, например, в методах аналитического профиля. Ложноотрицательный результат может наблюдаться, если образцу не дать остыть в течение примерно 30 минут при комнатной температуре или 10 минут в морозильной камере, поскольку сыворотка может разжижаться. Если результат действительно отрицательный, сыворотка останется жидкой после охлаждения. Список коагулязоположительных стафилококков: Staphylococcus aureus subsp. anaerobius, S. aureus subsp. aureus, S. delphini, S. hyicus, S. intermedius, S. lutrae и Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans. Список коагулязонегативных стафилококков, имеющих клиническое значение: S. saprophyticus, S. cohnii subsp. cohnii, S. cohnii subsp. urealyticum, S. captitus subsp. captitus, S. warneri, S. hominis, S. epidermidis, S. caprae и S. lugdunensis.