Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.
Содержание
Введение
3,3′-диаминобензидин (DAB) – органическое соединение с формулой (C6H3(NH2)2)2. Это производное бензидина является предшественником полибензимидазола, из которого получают волокна, известные своей химической и термической стабильностью. В виде водорастворимого тетрагидрохлорида DAB применяется для иммуногистохимического окрашивания нуклеиновых кислот и белков.
3,3′ Diaminobenzidine (DAB) is an organic compound with the formula (C6H3(NH2)2)2. This derivative of benzidine is a precursor to polybenzimidazole, which forms fibers that are renowned for their chemical and thermal stability. As its water soluble tetrahydrochloride, DAB has been used in immunohistochemical staining of nucleic acids and proteins.
Структура
DAB симметричен относительно центральной углерод-углеродной связи между двумя кольцевыми структурами. В кристалле кольца каждой молекулы лежат в одной плоскости, а аминогруппы соединяют молекулы, формируя межмолекулярную трехмерную сеть водородных связей.
DAB is symmetric about the central carbon bond between both ring structures. In the crystal, the rings of each molecule are co planar and the amine units connect molecules to form an intermolecular 3 dimensional hydrogen bond network.
Подготовка
Диаминобензидин, который доступен в продаже, получают путем обработки 3,3'-дихлорбензидина аммиаком в присутствии медного катализатора при высокой температуре и давлении, с последующей кислотной обработкой. Альтернативный путь синтеза включает диацилирование бензидина уксусным ангидридом в основных условиях. Растворимость DAB в воде обеспечивает большую гибкость по сравнению с другими детекционными растворами, использующими токсичные растворители. Неправильно подготовленные образцы тканей могут давать ложноположительные результаты. В исследованиях эта реакция используется для окрашивания клеток, обработанных ферментом пероксидазой, в соответствии со стандартными протоколами иммуноцитохимии. В контексте болезни Альцгеймера, амилоидные бляшки белка Aβ становятся мишенью для первичных антител, а затем для вторичных антител, конъюгированных с ферментом пероксидазы. Это приводит к связыванию DAB в качестве субстрата и его окислению, что создает легко видимый коричневый цвет. Затем количество бляшек можно определить для дальнейшей оценки. Другой метод использует комплексы инъецированного биоцитина с авидином или стрептавидином, биотином и, в конечном итоге, пероксидазой.
Diaminobenzidine, which is commercially available, is prepared by treating 3,3′ dichlorobenzidine with ammonia with a copper catalyst at high temperature and pressure, followed by acidic workup. An alternate synthesis route involves the diacylation of benzidine with acetic anhydride under basic conditions: The solubility of DAB in water allows for adaptability compared to other detection solutions which use toxic solvents. Improperly prepared tissue samples may give false positives. In research, this reaction is used to stain cells that were prepared with hydrogen peroxidase enzyme, following common immunocytochemistry protocols. Relevant to Alzheimer's disease, Aβ protein amyloid plaques are targeted by a primary antibody, and subsequently by a secondary antibody, which is conjugated with a peroxidase enzyme. This will bind DAB as a substrate and oxidize it, producing an easily observable brown color. Plaques can then be quantified for further evaluation. One other method uses complexes of injected biocytin with avidin or streptavidin, biotin, and then peroxidase.