Комплимент байланысу тізбегі: қағидалары мен қолданылуы
Complement fixation test
Комплимент байланысу тесті – антидене/антигенді анықтайтын иммунологиялық тест. Жұқпалы аурулар мен ревматизмді диагностикалауда қолданылды, бірақ қазір ELISA, ПТР сияқты әдістермен алмастырылды.
Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
Комплементті бекіту сынағы – пациент сарысуында нақты антидене немесе нақты антигеннің бар екенін, комплементті бекіту реакциясы жүзеге асуына байланысты анықтайтын иммунологиялық медициналық тест. Бұл тест инфекцияларды, әсіресе культуралық әдістермен анықтау қиын микробтармен және ревматикалық ауруларды диагностикалау үшін кеңінен қолданылды. Дегенмен, клиникалық диагностикалық зертханаларда оның орнын ELISA және патогендерді ДНК-ға негізделген әдістермен, әсіресе ПТР арқылы анықтау сияқты басқа серологиялық тесттер басты.
The complement fixation test is an immunological medical test that can be used to detect the presence of either specific antibody or specific antigen in a patient's serum, based on whether complement fixation occurs. It was widely used to diagnose infections, particularly with microbes that are not easily detected by culture methods, and in rheumatic diseases. However, in clinical diagnostics labs it has been largely superseded by other serological methods such as ELISA and by DNA based methods of pathogen detection, particularly PCR.
Процесс
Комплемент жүйесі – антиген-антитело кешендерімен әрекеттесетін сарысу ақуыздарының жүйесі. Егер бұл реакция жасуша бетінде жүрсе, трансмембраналық тесіктер пайда болып, жасушаның жойылуына әкеледі. Комплементті бекіту тестінің негізгі қадамдары төмендегідей:
The complement system is a system of serum proteins that react with antigen antibody complexes. If this reaction occurs on a cell surface, it will result in the formation of trans membrane pores and therefore destruction of the cell. The basic steps of a complement fixation test are as follows:
Пациенттен сарысу бөлінеді. Пациенттердің сарысуында комплемент ақуыздарының деңгейі әр түрлі болуы мүмкін. Бұл фактордың тестке әсерін болдырмау үшін, пациент сарысуындағы комплемент ақуыздары жойылып, белгілі бір мөлшердегі стандартталған комплемент ақуыздарымен алмастырылуы керек. Сарысу барлық комплемент ақуыздарын жою үшін, бірақ антителоларды жоймау үшін қыздырылады. (Бұл мүмкін, себебі комплемент ақуыздары антителоларға қарағанда жылуға жоғары сезімтал.) Сарысуға белгілі бір мөлшерде стандартты комплемент ақуыздары қосылады. (Бұл ақуыздар көбінесе теңіз шошқасының сарысуынан алынады.) Қызығушылық тудыратын антиген сарысуға қосылады. Антителоларға бұрыннан байланған қойдың қызыл қан клеткалары сарысуға қосылады. Егер осы кезде ерітінді қызғылт түске енсе, тест теріс деп есептеледі, әйтпесе – оң. Егер пациент сарысуында антигенге қарсы антителолар болса, олар 3-қадамда антигенмен байланысып, антиген-антитело кешенін құрайды. Комплемент ақуыздары осы кешендермен әрекеттесіп, толыққанды жойылады. Осылайша, 4-қадамда антитело кешендері қосылғанда, сарысуда комплемент қалмайды. Дегенмен, егер антигенге қарсы антителолар болмаса, комплемент жойылмайды және 4-қадамда қосылған антитело кешендерімен реакцияға түсіп, қан клеткаларын лиздейді және олардың құрамын ерітіндіге шығарып, ерітіндіні қызғылт түске бояйды.
Serum is separated from the patient. Patients naturally have different levels of complement proteins in their serum. To negate any effects this might have on the test, the complement proteins in the patient's serum must be destroyed and replaced by a known amount of standardized complement proteins. The serum is heated in such a way that all of the complement proteins—but none of the antibodies—within it are destroyed. (This is possible because complement proteins are much more susceptible to destruction by heat than antibodies.) A known amount of standard complement proteins are added to the serum. (These proteins are frequently obtained from guinea pig serum.) The antigen of interest is added to the serum. Sheep red blood cells which have been pre bound to anti antibodies are added to the serum. The test is considered negative if the solution turns pink at this point and positive otherwise. If the patient's serum contains antibodies against the antigen of interest, they will bind to the antigen in step 3 to form antigen antibody complexes. The complement proteins will react with these complexes and be depleted. Thus when the antibody complexes are added in step 4, there will be no complement left in the serum. However, if no antibodies against the antigen of interest are present, the complement will not be depleted and it will react with the antibody complexes added in step 4, lysing the and spilling their contents into the solution, thereby turning the solution pink.
Антигенді тексеру
Антителоларды анықтау – ең көп қолданылатын тест форматы, бірақ антигеннің болуын анықтау да мүмкін. Осы жағдайда, пациенттің сарысуына кешендердің түзілуін қозғау үшін белгілі бір антидене қосылады; комплемент пен индикатор бұрынғысынша қосылады.
While detection of antibodies is the most common test format, it is equally possible to test for the presence of antigen. In this case, the patient's serum is supplemented with specific antibody to induce formation of complexes; addition of complement and indicator is performed as before.
Жарым сандық сынақ
Сынақты емделуші сарысуының бірнеше есе сұйылту қатарын жасау және CF сынағының оң нәтиже беретін ең жоғары сұйылту дәрежесін анықтау арқылы сандыққа айналдыруға болады. Бұл сұйылту дәрежесі титр деп аталады.
The test can be made quantitative by setting up a series of dilutions of patient serum and determining the highest dilution factor that will still yield a positive CF test. This dilution factor corresponds to the titer.