Реакция связывания комплемента: принцип и применение.
Complement fixation test
Реакция фиксации комплемента: иммунологический тест для выявления антител/антигенов. Устаревший метод диагностики инфекций и ревматизма, замененный ELISA и ПЦР.
Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.
Содержание
Введение
Тест фиксации комплемента – это иммунологический медицинский тест, который позволяет выявлять наличие специфических антител или антигенов в сыворотке пациента, основываясь на том, происходит ли фиксация комплемента. Он широко применялся для диагностики инфекций, особенно тех, которые сложно обнаружить методами культивирования, а также при ревматических заболеваниях. Однако в клинико-диагностических лабораториях его в значительной степени заменили другие серологические методы, такие как ELISA, и методы обнаружения патогенов на основе ДНК, в частности ПЦР.
The complement fixation test is an immunological medical test that can be used to detect the presence of either specific antibody or specific antigen in a patient's serum, based on whether complement fixation occurs. It was widely used to diagnose infections, particularly with microbes that are not easily detected by culture methods, and in rheumatic diseases. However, in clinical diagnostics labs it has been largely superseded by other serological methods such as ELISA and by DNA based methods of pathogen detection, particularly PCR.
Процесс
Система комплемента – это система белков сыворотки, реагирующих с комплексами антиген-антитело. Если эта реакция происходит на поверхности клетки, это приводит к образованию трансмембранных пор и, следовательно, к разрушению клетки. Основные этапы теста фиксации комплемента следующие:
The complement system is a system of serum proteins that react with antigen antibody complexes. If this reaction occurs on a cell surface, it will result in the formation of trans membrane pores and therefore destruction of the cell. The basic steps of a complement fixation test are as follows:
Сыворотка отделяется от пациента. У пациентов естественным образом различается уровень белков комплемента в сыворотке. Чтобы нивелировать возможное влияние этого на результаты теста, белки комплемента в сыворотке пациента должны быть разрушены и заменены известным количеством стандартизированных белков комплемента. Сыворотка нагревается таким образом, чтобы все белки комплемента, но не антитела, были инактивированы. (Это возможно, поскольку белки комплемента гораздо более чувствительны к тепловому воздействию, чем антитела.) К сыворотке добавляется известное количество стандартных белков комплемента (эти белки часто получают из сыворотки морских свиней). Затем в сыворотку добавляется антиген, представляющий интерес. К сыворотке добавляют эритроциты барана, предварительно связанные с антителами. Тест считается отрицательным, если раствор становится розовым на этом этапе, и положительным – в противном случае. Если сыворотка пациента содержит антитела к интересующему антигену, они связываются с антигеном на этапе 3, образуя комплексы антиген-антитело. Белки комплемента будут реагировать с этими комплексами и истощаться. Таким образом, когда комплексы антител добавляются на этапе 4, в сыворотке не останется комплемента. Однако, если антител к интересующему антигену нет, комплемент не будет истощен и будет реагировать с комплексами антител, добавленными на этапе 4, вызывая лизис эритроцитов и высвобождение их содержимого в раствор, что приведет к окрашиванию раствора в розовый цвет.
Serum is separated from the patient. Patients naturally have different levels of complement proteins in their serum. To negate any effects this might have on the test, the complement proteins in the patient's serum must be destroyed and replaced by a known amount of standardized complement proteins. The serum is heated in such a way that all of the complement proteins—but none of the antibodies—within it are destroyed. (This is possible because complement proteins are much more susceptible to destruction by heat than antibodies.) A known amount of standard complement proteins are added to the serum. (These proteins are frequently obtained from guinea pig serum.) The antigen of interest is added to the serum. Sheep red blood cells which have been pre bound to anti antibodies are added to the serum. The test is considered negative if the solution turns pink at this point and positive otherwise. If the patient's serum contains antibodies against the antigen of interest, they will bind to the antigen in step 3 to form antigen antibody complexes. The complement proteins will react with these complexes and be depleted. Thus when the antibody complexes are added in step 4, there will be no complement left in the serum. However, if no antibodies against the antigen of interest are present, the complement will not be depleted and it will react with the antibody complexes added in step 4, lysing the and spilling their contents into the solution, thereby turning the solution pink.
Анализ на антиген
Хотя обнаружение антител является наиболее распространенным форматом теста, также возможно тестирование на наличие антигена. В этом случае к сыворотке пациента добавляют специфические антитела для образования комплексов; затем добавляют комплемент и индикатор, как и прежде.
While detection of antibodies is the most common test format, it is equally possible to test for the presence of antigen. In this case, the patient's serum is supplemented with specific antibody to induce formation of complexes; addition of complement and indicator is performed as before.
Полуколичественное тестирование
Испытание можно сделать количественным, подготовив серию разведений сыворотки пациента и определив наибольший коэффициент разбавления, при котором тест на комплемент-связывание (КФ) останется положительным. Этот коэффициент разбавления соответствует титру.
The test can be made quantitative by setting up a series of dilutions of patient serum and determining the highest dilution factor that will still yield a positive CF test. This dilution factor corresponds to the titer.