Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Кіріспе
Галактиозидалар - галактиозидтердің моносахаридтерге гидролизін катализациялайтын ферменттер (гликозид гидролазалары). Галактисоидтар альфа немесе бета болып жіктелуі мүмкін. Егер галактозид альфа- галактозид ретінде жіктелсе, фермент альфа- галактозидаза деп аталады және α- галактозид қалдықтары бар, мысалы, гликосфинголипидтер немесе гликопротеиндер бар субстраттардың гидролизіне катализатор болып табылады. Ал егер ол бета-галактозид болса, онда ол бета-галактозидаза деп аталады және дисахаридті лактозаны моносахаридтік компоненттерге, глюкоза мен галактозаға бөлу үшін жауап береді. Альфа- галактозидазаның екі рекомбинантты түрі - альфа- агалсидаза (ИНН) және бета- агалсидаза (ИНН) деп аталады. Альфа- галактозидазаның лейкоциттердегі белсенділігінің жетіспеушілігі Фабри ауруына байланысты. Галактиозидазалар пребиотиктердің өндірісі, трансгалактиозильденген өнімдердің биосинтезі және лактозаны алу сияқты әр түрлі мақсаттарда қолданылады. B галактозидаза бактерияларда ген экспрессиясын бақылау үшін пайдаланылатын lac z оперонның негізін құрайды.
Galactosidases are enzymes (glycoside hydrolases) that catalyze the hydrolysis of galactosides into monosaccharides. Galactosides can be classified as either alpha or beta. If the galactoside is classified as an alpha galactoside, the enzyme is called alpha galactosidase, and is responsible for catalyzing the hydrolysis of substrates that contain α galactosidic residues, such as glycosphingolipids or glycoproteins. On the other hand, if it is a beta galactoside, it is called beta galactosidase, and is responsible for breaking down the disaccharide lactose into its monosaccharide components, glucose and galactose Both varieties of galactosidase are categorized under the EC number 3.2.1. Two recombinant forms of alpha galactosidase are called agalsidase alfa (INN) and agalsidase beta (INN). Lack of alpha galactosidase activity in leukocytes has been linked to Fabry Disease. Galactosidases have a variety of uses, including the production of prebiotics, the biosynthesis of transgalactosylated products, and the removal of lactose. B galactosidase forms the basis of lac z operon in bacteria which can be used to control gene expression.
Қолданылуы
B галактозидазасын рекомбинантты плазмидпен бактериялық трансформацияның тиімділігін көк/ақ түсті скрининг деп аталатын процесте бақылау үшін пайдалануға болады. B галактозидаза 4 бірдей полипептидтік тізбектен тұрады, яғни 4 бірдей кіші бірлігі бар. В- галактозидаза 2 фрагментке бөлінген кезде, ол белсенді емес фрагменттер қайта қосылған кезде ферменттік белсенділікті қалпына келтірудің ерекше қасиетіне ие. Альфа-комплементация деп аталатын процесте фрагменттердің бірі (омега) бактериялардың хромосомасында кездесетін лака оперонның генінің бір бөлігімен, ал екінші фрагмент (альфа) плазмидте кездесетін геннің басқа бөлігімен кодталады. Тек геннің екі бөлігі де экспрессияланатын кезде ғана омега және альфа фрагменттері пайда болады. Екі фрагмент те кездескенде олар бірігіп, В галактозидазаның белсенділігін қалпына келтіреді. Алайда, мақсатты генді альфа-фрагментті кодтау үшін жауапты локусқа орналастыру арқылы плазмидтегі қажетті геннің болуын қадағалай алады. Мақсатты ген болған кезде альфа-фрагмент генінің белсенділігі төмен болады және альфа-фрагмент пайда болмайды. Бұл жағдайда B галактозидаза белсенді болмайды. Егер векторда мақсатты ген табылмаса, альфа-фрагмент ген белсенді болып, альфа-фрагментті шығарып, В галактозидазаның белсенділігін арттырады. В галактозидазаның белсенділігін анықтау үшін лактозаның түссiз аналогы X gal қолданылады. X галь- ді B галактозидазаның гидролизі көк түсті қосылысты - галактозаны шығарады. Сондықтан, бактериялар рекомбинантты плазмидпен трансформацияланған кезде B галактозидаза белсенді болмайды және колониялар ақ түсті болады, ал бактериялар бастапқы плазмидпен трансформацияланған кезде, нысаналық ген жоқ, B галактозидаза белсенді болады және колониялар көк түсті болады.
B galactosidase can be used to track the efficiency of bacterial transformation with a recombinant plasmid in a process called Blue/White Color Screening. B galactosidase is made up of 4 identical polypeptide chains, i. e. it has 4 identical subunits. When B galactosidase is separated into 2 fragments, it has the unique property of regaining enzymatic activity upon the rejoining of the inactive fragments. In the process called alpha complementation, one of the fragments (omega) is encoded by a part of a gene of the lac operon that is found in the chromosome of the bacteria, while the other fragment (alpha) is encoded by the other part of the gene that is found in the plasmid. It is only when both parts of the gene are being expressed that both the omega and alpha fragments are produced. When both fragments are present they would come together to restore the activity of B galactosidase. However, by placing the target gene within the locus responsible for encoding the alpha fragment, one can track the presence of the desired gene in the plasmid. When the target gene is present, the alpha fragment gene would be inactive and the alpha fragment won't be produced. In that case B galactosidase will not be active. When the target gene is not found in the vector, the alpha fragment gene would be active, producing the alpha fragment and allowing for B galactosidase to gain its activity. To trace the activity of B galactosidase a colorless analog of lactose is used, X gal. The hydrolysis of X gal by B galactosidase produces galactose, a blue colored compound. Therefore, when the bacteria is transformed with the recombinant plasmid B galactosidase is inactive and the colonies appear white, but when bacteria are transformed with the original plasmid, lacking the target gene, B galactosidase is active and the colonies appear blue.