Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.
Содержание
Введение
Микробиологический и биохимический метод идентификации. Оксидазный тест используется для определения наличия у микроорганизма фермента цитохром-с-оксидазы. Тест применяется для дифференциации видов Neisseria, Moraxella, Campylobacter и Pasteurella (окислительно-положительные). Он также используется для дифференциации псевдомонад от близкородственных видов.
Microbiological and biochemical method for identification
The oxidase test is used to determine whether an organism possesses the cytochrome c oxidase enzyme. The test is used as an aid for the differentiation of Neisseria, Moraxella, Campylobacter and Pasteurella species (oxidase positive). It is also used to differentiate pseudomonads from related species.
Классификация
Штаммы могут быть как оксидазоположительными (OX+), так и оксидазоотрицательными (OX-).
Strains may be either oxidase positive (OX+) or oxidase negative (OX ).
ОХ+
OX+ обычно означает, что бактерия содержит цитохром c оксидазу (также известную как комплекс IV) и, следовательно, способна использовать кислород для выработки энергии, преобразуя O2 в H2O2 или H2O посредством цепи переноса электронов. Семейство Pseudomonadaceae обычно является OX+. Многие грамотрицательные спиральноизогнутые бактерии также дают положительный результат в тесте на оксидазу, включая Helicobacter pylori, Vibrio cholerae и Campylobacter jejuni.
OX+ normally means the bacterium contains cytochrome c oxidase (also known as Complex IV) and can therefore use oxygen for energy production by converting O2 to H2O2 or H2O with an electron transfer chain. The Pseudomonadaceae are typically OX+. Many Gram negative, spiral curved rods are also oxidase positive, which includes Helicobacter pylori, Vibrio cholerae, and Campylobacter jejuni.
Изменная окислительность
Легионелла пневмофила может давать положительную реакцию на оксидазу.
Legionella pneumophila may be oxidase positive.
ОХ−
OX− обычно означает, что бактерия не содержит цитохром c оксидазы и, следовательно, либо не способна использовать кислород для получения энергии посредством цепи переноса электронов, либо использует другой цитохром для переноса электронов к кислороду. Энтеробактерии обычно OX−.
OX− normally means the bacterium does not contain cytochrome c oxidase and, therefore, either cannot use oxygen for energy production with an electron transfer chain or employs a different cytochrome for transferring electrons to oxygen. Enterobacteriaceae are typically OX−.
Механизм
Для теста используются диски, пропитанные реагентом, таким как N,N,N′,N′ тетраметил-п-фенилендиамин, TMPD (или N,N диметил-п-фенилендиамин, DMPD, который также является окислительно-восстановительным индикатором). Реагент имеет темно-синий или бордовый цвет в окисленном состоянии и бесцветен в восстановленном. Оксидазоположительные бактерии содержат цитохромную оксидазу или индофеноловую оксидазу (железосодержащий гемопротеин). Обе эти оксидазы катализируют перенос электронов от доноров (NADH) к акцепторам электронов (обычно кислороду). Реагент TMPD в тесте выступает в роли искусственного донора электронов для фермента оксидазы. Окисленный реагент образует окрашенное соединение – индофенол синего цвета. Цитохромная система обычно присутствует только в аэробных организмах, способных использовать кислород в качестве конечного акцептора электронов. Конечными продуктами этого метаболизма являются вода или перекись водорода (разлагаемая каталазой).
The test uses disks impregnated with a reagent such as N,N,N′,N′ tetramethyl p phenylenediamine, TMPD (or N,N dimethyl p phenylenediamine, DMPD, which is also a redox indicator). The reagent is a dark blue to maroon color when oxidized, and colorless when reduced. Oxidase positive bacteria possess cytochrome oxidase or indophenol oxidase (an iron containing hemoprotein). These both catalyze the transport of electrons from donor compounds (NADH) to electron acceptors (usually oxygen). The test reagent TMPD acts as an artificial electron donor for the enzyme oxidase. The oxidized reagent forms the colored compound indophenol blue. The cytochrome system is usually only present in aerobic organisms that are capable of using oxygen as the terminal electron acceptor. The end product of this metabolism is either water or hydrogen peroxide (broken down by catalase).
Процедуры
Намочите каждый диск примерно четырьмя петлями инокулятора деионизированной воды. Используйте петлю для асептического переноса большого количества чистых бактерий на диск. Наблюдайте за диском в течение до трех минут. Если область инокуляции становится темно-синей, бордовой или почти черной, результат считается положительным. Если изменение цвета не происходит в течение трех минут, результат отрицательный. В качестве альтернативы, живые бактерии, выращенные на чашках с триптиказным соевым агаром, могут быть приготовлены с использованием стерильной техники методом прямой посевной линии. Инкубируйте инокулированные чашки при 37 °C в течение 24–48 часов для образования колоний. Следует использовать свежие бактериальные препараты. После роста колоний на среде, на поверхность каждой тестируемой культуры добавляют 2–3 капли реагента DMPD. Положительный тест (OX+) приведет к изменению цвета от фиолетового до пурпурного в течение 10–30 секунд. Отрицательный тест (OX–) будет характеризоваться светло-розовым цветом или отсутствием окраски.
Wet each disk with about four inoculating loops of deionized water. Use a loop to aseptically transfer a large mass of pure bacteria to the disk. Observe the disk for up to three minutes. If the area of inoculation turns dark blue to maroon to almost black, then the result is positive. If a color change does not occur within three minutes, the result is negative. In alternative manner, live bacteria cultivated on trypticase soy agar plates may be prepared using sterile technique with a single line streak inoculation. The inoculated plates are incubated at 37 °C for 24–48 hours to establish colonies. Fresh bacterial preparations should be used. After colonies have grown on the medium, 2 3 drops of the reagent DMPD are added to the surface of each organism to be tested. A positive test (OX+) will result in a color change violet to purple, within 10–30 seconds. A negative test (OX ) will result in a light pink or absence of coloration.