Микробиологиялық және биохимиялық әдіспен бактерияларды анықтау (Оксидаза тесті)
Oxidase test
Оксидаза тесті: бактерияларды (Neisseria, Moraxella, Campylobacter, Pasteurella) анықтау, цитохром c оксидазасын табу және энергия өндіру жолдарын білу.
Ағылшыншамен салыстырыңыз: абзацты басыңыз — түпнұсқа терезеде ашылады. Абзац астындағы EN түймесі оны мәтін ішінде көрсетеді.
Мазмұны
Кіріспе
Микробиологиялық және биохимиялық анықтау әдісі. Оксидаза сынағы организмде цитохром c оксидаза ферментінің болуын анықтау үшін қолданылады. Бұл сынақ Neisseria, Moraxella, Campylobacter және Pasteurella түрлерін (оксидазаға оң нәтиже беретін) ажыратуға көмектеседі. Сонымен қатар, ол псевдомонадтарды олармен туысқан түрлерден ажыратуға да қолданылады.
Microbiological and biochemical method for identification
The oxidase test is used to determine whether an organism possesses the cytochrome c oxidase enzyme. The test is used as an aid for the differentiation of Neisseria, Moraxella, Campylobacter and Pasteurella species (oxidase positive). It is also used to differentiate pseudomonads from related species.
Жіктеу
Штамдар оксидазаға оң (OX+) немесе оксидазаға теріс (OX-) болуы мүмкін.
Strains may be either oxidase positive (OX+) or oxidase negative (OX ).
ОХ+
OX+ әдетте бактерияда цитохром c оксидазасы (сонымен қатар IV кешені деп те аталады) бар екенін көрсетеді, сондықтан ол электрондық тасымалдау тізбегі арқылы O2-ні H2O2 немесе H2O-ға айналдырып, энергия өндіру үшін оттекті пайдалана алады. Pseudomonadaceae отбасының бактериялары көбінесе OX+ болады. Көптеген грам-теріс, спираль тәрізді қисық таяқшалар да оксидазаға оң реакция береді, олардың ішінде Helicobacter pylori, Vibrio cholerae және Campylobacter jejuni бактериялары бар.
OX+ normally means the bacterium contains cytochrome c oxidase (also known as Complex IV) and can therefore use oxygen for energy production by converting O2 to H2O2 or H2O with an electron transfer chain. The Pseudomonadaceae are typically OX+. Many Gram negative, spiral curved rods are also oxidase positive, which includes Helicobacter pylori, Vibrio cholerae, and Campylobacter jejuni.
Оксидазаның өзгермелі
Легионелла пневмофила оксидазаға оң реакция бере алады.
Legionella pneumophila may be oxidase positive.
ОХ-
OX− - бактерия цитохром c оксидазасын қамтымайды, демек, энергия өндіру үшін электрондық тасымалдау тізбегі арқылы оттекті пайдалана алмайды немесе электрондарды оттегіге беру үшін басқа цитохромды қолданады. Энтеробактериялар әдетте OX− болып табылады.
OX− normally means the bacterium does not contain cytochrome c oxidase and, therefore, either cannot use oxygen for energy production with an electron transfer chain or employs a different cytochrome for transferring electrons to oxygen. Enterobacteriaceae are typically OX−.
Механизм
Сынақ кезінде N,N,N′,N′ тетраметил-п-фенилендиамин, TMPD (немесе N,N диметил-п-фенилендиамин, DMPD, ол да тотығу-тотығуды қайтару индикаторы) сияқты реагенттермен сіңген дискілер қолданылады. Реагент тотыққанда қара-көк түске дейін немесе қоңыр түске дейін, ал тотығудан кейін түссіз болады. Оксидазаға оң нәтиже берген бактериялар цитохром оксидазасына немесе индофенол оксидазасына (темір қосқан гемопротеин) ие. Екеуі де донорлық қосылыстардан (NADH) электрон қабылдағыштарға (әдетте оттегіге) электрондардың тасымалдануын катализдейді. Сынақ реагенті – TMPD фермент оксидаза үшін жасанды электрон доноры ретінде әрекет етеді. Тотыққан реагент боялған қосылыс – индофенол көгін құрайды. Цитохромдық жүйе әдетте тек оттекті соңғы электрон қабылдағышы ретінде пайдалана алатын, ауада тыныс алатын организмдерде кездеседі. Бұл метаболизмнің соңғы өнімдері су немесе сутек пероксиді (каталазамен ыдырайды).
The test uses disks impregnated with a reagent such as N,N,N′,N′ tetramethyl p phenylenediamine, TMPD (or N,N dimethyl p phenylenediamine, DMPD, which is also a redox indicator). The reagent is a dark blue to maroon color when oxidized, and colorless when reduced. Oxidase positive bacteria possess cytochrome oxidase or indophenol oxidase (an iron containing hemoprotein). These both catalyze the transport of electrons from donor compounds (NADH) to electron acceptors (usually oxygen). The test reagent TMPD acts as an artificial electron donor for the enzyme oxidase. The oxidized reagent forms the colored compound indophenol blue. The cytochrome system is usually only present in aerobic organisms that are capable of using oxygen as the terminal electron acceptor. The end product of this metabolism is either water or hydrogen peroxide (broken down by catalase).
Іс-шаралар
Әрбір дискіні шамамен төрт инокуляциялық циклге тең деионизацияланған сумен ылғалдандырыңыз. Дискіге таза бактериялардың үлкен массасын асептикалық түрде көшіру үшін циклді пайдаланыңыз. Дискіні үш минутқа дейін бақылаңыз. Егер егу аймағы қою көк, қоңыр немесе қара түске енсе, нәтиже оң болады. Егер үш минут ішінде түс өзгермесе, нәтиже теріс болады. Балама ретінде, триптиказалы соя агары тақталарында өсірілген тірі бактерияларды стерильді техника қолданып, бір жолды сызықпен егу арқылы дайындауға болады. Егілген тақталар 37°C температурада 24–48 сағат бойы инкубацияланады, осылайша колониялар қалыптасады. Жаңа бактериялық препараттар қолданылуы тиіс. Ортада колониялар өскеннен кейін, сынаққа алынатын әрбір организмнің бетіне 2-3 тамшы DMPD реагенті қосылады. Оң нәтиже (OX+) 10-30 секунд ішінде күлгін түске өзгеруімен сипатталады. Теріс нәтиже (OX-) ақшыл қызғылт түс немесе түссіздік болып табылады.
Wet each disk with about four inoculating loops of deionized water. Use a loop to aseptically transfer a large mass of pure bacteria to the disk. Observe the disk for up to three minutes. If the area of inoculation turns dark blue to maroon to almost black, then the result is positive. If a color change does not occur within three minutes, the result is negative. In alternative manner, live bacteria cultivated on trypticase soy agar plates may be prepared using sterile technique with a single line streak inoculation. The inoculated plates are incubated at 37 °C for 24–48 hours to establish colonies. Fresh bacterial preparations should be used. After colonies have grown on the medium, 2 3 drops of the reagent DMPD are added to the surface of each organism to be tested. A positive test (OX+) will result in a color change violet to purple, within 10–30 seconds. A negative test (OX ) will result in a light pink or absence of coloration.