Кіріспе

Молекулалық азотты биологиялық қолжетімді азот қосылыстарына түрлендіру

Азотты бекіту – бұл молекулалық азотты, оның күшті үш ковалентті байланысы бар, әдетте топырақ немесе су жүйелерінде, сондай-ақ өнеркәсіпте аммиакқа немесе ұқсас азотты қосылыстарға айналдыратын химиялық процесс. Ауадағы азот – молекулалық динитроген, салыстырмалы түрде инертті молекула, ол азаз саны шектеулі микроорганизмдерден басқа барлық тірі организмдер үшін метаболизмде қолданылмайды. Биологиялық азотты бекіту немесе диазотрофия – азоттоқсанды (Nif) белок кешенін пайдалана отырып, динитроген (N2) газын аммиакқа (NH3) түрлендіретін микробтармен катализделетін маңызды процесс. Азотты бекіту өмір үшін маңызды, себебі бекітілген бейорганикалық азот қосылыстары аминқышқылы мен ақуыздар, нуклеозид трифосфаттары және нуклеин қышқылы сияқты азотты барлық органикалық қосылыстардың биосинтезі үшін қажет. Азот айналымының бір бөлігі ретінде, ол ауыл шаруашылығы және тыңайтқыштар өндірісі үшін маңызды. Бұған қоса, ол жанама түрде барлық азотты химиялық қосылыстардың, соның ішінде кейбір жарылғыш заттардың, фармацевтикалық препараттардың және бояулардың өндірісіне қатысты. Азотты бекіту топырақта диазотрофтар деп аталатын микроорганизмдер арқылы табиғи түрде жүзеге асырылады, олар бактериялар (мысалы, Azotobacter және Rhizobium) және археяларды қамтиды. Кейбір азотты бекітетін бактериялар өсімдіктер тобымен, әсіресе бұршақтармен симбиоздық қарым-қатынас жасайды. Диазотрофтар мен өсімдіктер арасындағы симбиоздық емес қарым-қатынастар көбінесе ассоциативтік деп аталады, мысалы, күріш тамырындағы азотты бекітуде. Азотты бекіту кейбір термиттер мен саңырауқұлақтар арасында да жүреді. Ол табиғи түрде ауада найзағайдың NOx өндіруі арқылы пайда болады. Азотты бекіту процесіне қатысатын барлық биологиялық реакциялар нитрогеназалар деп аталатын ферменттермен катализделеді. Бұл ферменттерде темір болады, көбінесе екінші металл – әдетте молибден, кейде ванадий.

Тарих

Биологиялық азотты бекітуді 1838 жылы Жан Батист Бусинго ашқан. Кейін, 1880 жылы неміс агрономдары Герман Хеллригель мен Герман Вильфарт осы процестің қалай жүретінін анықтады, ал голландиялық микробиолог Мартинус Бейжеринк оны толық сипаттады. "Де Соссюр, Вилле, Лоуес, Гилберт және басқалар бастаған, өсімдіктердің азотты қабылдауына қатысты ұзақ зерттеулер 1887 жылы Хеллригель мен Вильфарттың симбиоздық бекітуді ашуымен аяқталды." "Бусингоның 1855 жылғы және Пью, Гилберт пен Лоуестің 1887 жылғы тәжірибелері азоттың тікелей өсімдікке енбейтінін көрсетті. Герман Хеллригель мен Герман Вильфарттың 1886-1888 жылдары азотты бекітетін бактериялардың рөлін ашқандығы топырақ ғылымының жаңа дәуірін ашты." 1901 жылы Бейжеринк Azotobacter chroococcum атмосфералық азотты бекіте алатынын көрсетті. Бұл оның атымен аталған азотобактер туысының алғашқы түрі болды. Сонымен қатар, бұл толық азот циклының бір қадамы ретінде диатомикалық азотты пайдаланатын алғашқы диазотроф.

Биологиялық

Биологиялық азотты бекіту (BNF) атмосфералық азоттың нитрогеназа ферменті арқылы аммиакқа түрленуі кезінде жүзеге асады. Аммиакқа айналу процесі FeMoco деп аталатын металл кластерінде өтеді, ол темір-молибден кофакторының аббревиатурасы. Механизм протондалу және редукциялау қадамдарының тізбегі арқылы жүреді, онда FeMoco активті орны субстратты гидрогендейді. Бос тіршілік ететін диазотрофтарда нитрогеназа арқылы түзілген аммиак, глютамин синтетаза/глютамат синтетаза жолы арқылы глутаматқа ассимиляцияланады. Азотты бекітуге қажетті микробтық nif гендері әртүрлі ортада кеңінен таралған. Мысалы, азоттың төмен мөлшері бар, шіруге ұшыраған ағаштарда диазотрофтық қоғамдастық бар екені көрсетілген. Бактериялар ағаш субстратын азотпен байытады, осылайша саңырауқұлақтардың өлі ағаштарды ыдыратуына мүмкіндік береді. Нитрогеназалар оттегімен жылдам ыдырайды. Сондықтан көптеген бактериялар оттегінің болуында фермент өндіруді тоқтатады. Көптеген азотты бекітетін организмдер тек анаэробты жағдайларда ғана өмір сүреді, оттегі деңгейін төмендету үшін тыныс алады немесе оттегіні легемоглобин сияқты белокпен байланыстырады, себебі оның үш ковалентті байланысы өте мықты. Көбінесе әртүрлі көздерден бекітілген азотты сіңіреді. Әр 100 көміртек атомына шамамен 2-ден 20 атомға дейін азот ассимиляцияланады. Планктондық биомассада байқалатын көміртек (С): азот (N): фосфор (P) атомдық қатынасын алғаш Альфред Редфилд сипаттаған, ол С:N:P атомдары арасындағы стехиометриялық қатынасты, Редфилд қатынасын 106:16:1 деп анықтаған. Цианобактерияларда бұл ферменттік жүйе гетероцист деп аталатын арнайы жасушада орналасқан. Нитрогеназа кешенінің өндірісі генетикалық түрде реттеледі, ал ақуыз кешенінің активтілігі қоршаған ортадағы оттегінің концентрациясына, аммиак пен тотыққан азот түрлерінің (нитрат және нитрит) ішкі және жасушааралық концентрациясына байланысты. Сонымен қатар, аммиак пен нитраттың біріктірілген концентрациясы NFix-ті тежейді деп есептеледі, әсіресе 2-оксоглутараттың (2 OG) жасушалық концентрациясы белгілі бір шектен асқанда. Арнайы гетероцист жасушасы, нитрогеназаның қоршаған ортаның оттегіне сезімталдығының нәтижесінде жұмыс істеуі үшін қажет. Нитрогеназа екі ақуыздан тұрады: каталитикалық, темірге тәуелді ақуыз, көбінесе MoFe ақуызы және тек темірді азайтатын ақуыз (Fe ақуызы). Темірге тәуелді үш түрлі ақуыз бар: молибденге тәуелді, ванадийге тәуелді және тек темірге тәуелді, барлық үш нитрогеназа ақуыз нұсқаларында темір ақуыз компоненті бар. Молибденге тәуелді нитрогеназа ең көп кездесетін нитрогеназа. Нитрогеназа жоғары сақталған. ДНҚ тізбегі арқылы ген экспрессиясы микроорганизмде қандай ақуыз кешенінің бар екенін және потенциалды түрде экспрессияланатынын анықтауға мүмкіндік береді. Көбінесе nifH гені молибденге тәуелді нитрогеназаның болуын анықтау үшін қолданылады, содан кейін тығыз байланысты нитрогеназа редуктазалары (II компонент) vnfH және anfH сәйкесінше ванадийге тәуелді және тек темірге тәуелді нитрогеназаларды көрсетеді. Азотты бекітетін бактериялардың экологиясы мен эволюциясын зерттеуде nifH гені ең көп қолданылатын биомаркер болып табылады. nifH екі ұқсас генге ие: anfH және vnfH, олар да нитрогеназа кешенінің нитрогеназа редуктаза компонентіне кодтайды.

Азоттанудың эволюциясы

Нитрогеназаның пайда болуы палеобиологтарды қызықтырады және осы мәселе бойынша белсенді зерттеулер жүргізілуде. Нитрогеназаның шамамен 1,5-2,2 миллиард жыл бұрын (Га) пайда болғаны есептеледі, алайда кейбір изотоптық деректер нитрогеназаның 3,2 миллиард жыл бұрын пайда болғанын көрсетеді. Нитрогеназа матураза сияқты ақуыздардан дамыған болуы мүмкін, бірақ бұл ақуыздың алдыңғы функциясы қазірге дейін белгісіз. Нитрогеназаның үш түрі бар (Nif, Anf және Vnf), олар ақуыздың активті орнындағы металлға (сәйкесінше молибден, темір және ванадий) байланысты. Жердің геологиялық тарихындағы теңіздегі металлдардың мөлшері, нитрогеназаның қай түрі басым болғанына әсер еткен деп саналады. Қазіргі таңда нитрогеназаның қай түрі бірінші пайда болғаны туралы нақты пікір жоқ.

Микроорганизмдер

Диазотрофтар бактериялар доменінде кең таралған, оның ішінде цианобактериялар (мысалы, өте маңызды Trichodesmium және Cyanothece), жасыл күкірт бактериялары, күлгін күкірт бактериялары, Azotobacteraceae, ризобиялар және Frankia. Көптеген (бірақ барлығы емес) Clostridium spp. сияқты бірнеше міндетті анаэробты бактериялар азотты бекітеді. Метаносарцина ацетиворан сияқты кейбір археялар да азотты бекітеді, сондай-ақ бірнеше басқа метаногендік таксондар оттегі аз топырақта азотты бекітуге маңызды үлес қосады. Көк-жасыл балдырлар деп белгілі цианобактериялар Жердегі жарық түсетін барлық ортада кездеседі және биосфераның көміртек және азот айналымында маңызды рөл атқарады. Жалпы алғанда, цианобактериялар нитрат, нитрит, аммоний, мочевина немесе кейбір аминқышқылдары сияқты әртүрлі бейорганикалық және органикалық азот көздерін пайдалана алады. Бірнеше цианобактерия штамдары диазотрофтық өсуге қабілетті, бұл қасиет Архей дәуіріндегі олардың соңғы ортақ ата-тегінде болған болуы мүмкін. Азотты бекіту топырақта ғана емес, тұщы және теңіз жүйелерінде де табиғи түрде жүзеге асырады. Шындығында, мұхиттарда бекітілген азот мөлшері құрлықтағы азоттан кем емес. Колониялық теңіз цианобактериясы Trichodesmium жаһандық теңіз жүйелеріндегі азотты бекітудің шамамен жартысына дейін қамтамасыз ететіндей масштабта азотты бекітеді деп есептеледі. Теңіз бетіндегі лишайлар және Proteobacteria және Planctomycetes-ке жататын фотосинтез жасай алмайтын бактериялар маңызды атмосфералық азотты бекітеді. Тұщы суларда азотты бекітетін цианобактериялардың түрлеріне Aphanizomenon және Dolichospermum (бұрынғы Anabaena) жатады. Мұндай түрлерде нитрогеназа ферменті арқылы азотты бекіту жүзеге асырылатын гетероциттер деп аталатын арнайы жасушалар бар.

Балық тұқымы

Органельдердің бір түрі азот газын тірі организмдерге қолданылатын формаға айналдыра алады. Бұл нитропласт балдырларда ашылды.

Өсімдіктер тұқымдасы

Азотты бекітуге үлес қосатын өсімдіктерге бұршақ тұқымдас Fabaceae отрядының өсімдіктері жатады, олардың ішінде кудзу, қызыл қондырша, соя, люцерна, люпин, жержаңғақ және ройбос бар. Өсімдік өлген кезде бекітілген азот босатылып, басқа өсімдіктерге қолжетімді болады; бұл топырақты тыңайтуға көмектеседі. Бұршақ тұқымдас өсімдіктердің көпшілігінде осы байланыс бар, бірақ кейбір туыстарда (мысалы, Styphnolobium) жоқ. Көптеген дәстүрлі егіс шаруашылығы тәжірибелерінде егістік алқаптары әртүрлі дақылдармен кезектестіріледі, олардың ішінде көбінесе негізінен немесе толығымен қызыл қондыршадан тұратын дақылдар болады. Топырақтағы азотты бекіту тиімділігі көптеген факторларға байланысты, оның ішінде бұршақ тұқымдас өсімдіктерге және ауа-райы мен топырақ жағдайларына. Мысалы, қызыл қондыршаның азотты бекітуі .

Тарихи

Азотты бекіту әдісін алғаш рет Генри Кавендиш 1784 жылы ауадағы азот пен оттегіні электр доғасы арқылы реакцияға түсіріп сипаттады. Бұл әдіс 1903 жылы Биркеланд-Эйд процесінде қолданысқа енгізілді. Найзағай арқылы азотты бекіту – табиғатта өте ұқсас жүретін процесс. Атмосфералық азоттың белгілі бір химиялық заттармен реакцияға түсу мүмкіндігін алғаш рет 1828 жылы Десфосс байқады. Ол сілтілі металл оксидтері мен көміртегі қоспаларының жоғары температурада азотпен әрекеттесетінін анықтады. Барий карбонатын бастапқы материал ретінде пайдаланып, алғашқы коммерциялық процесс 1860 жылдары Маргерит және Сурдевал еңбегімен қолжетімді болды. Соның нәтижесінде алынған барий цианиді бумен реакцияға түсіп, аммиак береді. 1898 жылы Франк пен Каро азотты кальций цианамиді түрінде бекітуге арналған Франк-Каро процесін жасады. Бұл процесс 1909 жылы ашылған Хабер процесімен ығыстырылды.

Хабер процесі

Аммиак өндірудің басым өнеркәсіптік әдісі – Хабер процесі, сондай-ақ Хабер-Бош процесі деп те аталады. Тыңайтқыш өндірісі қазіргі уақытта құрлықтағы экожүйеде адам жасаған бекітілген азоттың ең ірі көзі болып табылады. Аммиак – тыңайтқыштар, жарылғыш заттар және басқа да өнімдер үшін қажетті алғыр зат. Хабер процесіне өнеркәсіптік катализ үшін қалыпты жағдайлар саналатын жоғары қысым (шамамен 200 атмосфера) және жоғары температура (кем дегенде 400 °C) талап етіледі. Бұл процесте сутегі көзі ретінде табиғи газ, ал азот көзі ретінде ауа пайдаланылады. Аммиак өнімдерінің нәтижесінде азотты тыңайтқыштардың қолданылуы күшейді және бұл 20 ғасырдың басындағы шамамен 2 миллиардтан қазіргі 8 миллиардқа дейін адам санының өсуіне ықпал етті.

Біртекті катализа

Азотты бекітуге арналған катализаторларды ашу бойынша көптеген зерттеулер жүргізілді, көбінесе энергия талаптарын төмендету мақсатында. Дегенмен, осындай зерттеулердің нәтижесінде Хабер процесінің тиімділігі мен қарапайымдылығына қол жеткізілген жоқ. Көптеген қосылыстар атмосфералық азотпен реакцияласып, динитрогендік кешендерді түзеді. Алғашқы хабарланған динитрогендік кешен 2+ болды. Кейбір ерітіндідегі кешендер азотты бекітуді катализдейді.

Жарық

Азотты найзағайдың азот газы мен оттегі газын атмосферада (азот оксидтері) түрлендіруі арқылы бекітуге болады. Молекула азот атомдары арасындағы үш байланыстың болуына байланысты өте тұрақты және реакцияға түспейді. Найзағай осы байланысты бұзуға жеткілікті энергия мен жылу шығарады, ол сумен реакцияласып (азот қышқылы) немесе (азотты тұз қышқылы) түзеді. Бұл қышқылдар топыраққа сіңгенде, өсімдіктерге пайдалы NO3 (нитрат) пайда болады.