Фракционирование клеток: разделение и сохранение функциональности компонентов.
Cell fractionation
Фракционирование клеток: разделение клеточных компонентов с сохранением функций. Методы гомогенизации, применение в биохимии и диагностике заболеваний.
Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.
Содержание
Введение
Разделение компонентов клетки при сохранении их функций
Separating components of a cell while preserving their functions
В клеточной биологии фракционирование клеток – это процесс, используемый для разделения клеточных компонентов с сохранением функциональности каждого из них. Изначально этот метод применялся для определения клеточного местоположения различных биохимических процессов. Другие применения фракционирования субклеточных компонентов включают получение обогащенного источника белка для дальнейшей очистки и облегчение диагностики различных заболеваний.
In cell biology, cell fractionation is the process used to separate cellular components while preserving individual functions of each component. This is a method that was originally used to demonstrate the cellular location of various biochemical processes. Other uses of subcellular fractionation is to provide an enriched source of a protein for further purification, and facilitate the diagnosis of various disease states.
Гомогенизация
Ткань обычно гомогенизируется в буферном растворе, изотоничном для предотвращения осмотического повреждения. Методы гомогенизации включают измельчение, нарезание, рубку, изменение давления, осмотический шок, замораживание-оттаивание и ультразвуковую обработку. Затем образцы поддерживают в холодном состоянии, чтобы предотвратить ферментативное повреждение. В результате формируется однородная масса клеток (клеточный гомогенат или клеточная суспензия). Этот процесс включает измельчение клеток в подходящей среде в присутствии определенных ферментов с оптимальным pH, ионным составом и температурой. Например, пектиназа, которая расщепляет среднюю пластинку между растительными клетками.
Tissue is typically homogenized in a buffer solution that is isotonic to stop osmotic damage. Mechanisms for homogenization include grinding, mincing, chopping, pressure changes, osmotic shock, freeze thawing, and ultrasound. The samples are then kept cold to prevent enzymatic damage. It is the formation of homogenous mass of cells (cell homogenate or cell suspension). It involves grinding of cells in a suitable medium in the presence of certain enzymes with correct pH, ionic composition, and temperature. For example, pectinase which digests middle lamella among plant cells.
Фильтрация
В зависимости от источника клеток этот шаг может быть необязательным. Однако ткани животного происхождения, скорее всего, содержат соединительную ткань, которую необходимо удалить. Обычно фильтрацию проводят либо путем проливания через марлю, либо с использованием вакуумного фильтра и керамического фильтра соответствующей пористости.
This step may not be necessary depending on the source of the cells. Animal tissue however is likely to yield connective tissue which must be removed. Commonly, filtration is achieved either by pouring through gauze or with a suction filter and the relevant grade ceramic filter.
Очищение
Очистка достигается с помощью дифференциального центрифугирования – последовательное увеличение центростремительной силы приводит к последовательному разделению органелл в зависимости от их плотности.
Purification is achieved by differential centrifugation – the sequential increase in gravitational force results in the sequential separation of organelles according to their density.