Введение

Комплекс физико-химических методов разделения смесей – альбом от Second Person.

В химическом анализе хроматография – это лабораторный метод разделения смеси на компоненты. Смесь растворяется в подвижной фазе – жидком или газообразном растворителе, которая переносит ее через систему (колонку, капиллярную трубку, пластину или лист), на которой закреплен материал, называемый стационарной фазой. Поскольку различные компоненты смеси обладают разной степенью сродства к стационарной фазе и задерживаются на разное время в зависимости от их взаимодействия с ее поверхностью, они перемещаются в подвижной фазе с разной кажущейся скоростью, что приводит к их разделению. Разделение основано на различии в распределении между подвижной и стационарной фазами. Незначительные различия в коэффициенте распределения вещества приводят к различной степени его удержания на стационарной фазе и, следовательно, влияют на разделение. Хроматография может быть препаративной или аналитической. Цель препаративной хроматографии – разделение компонентов смеси для последующего использования, что делает ее методом очистки. Этот процесс связан с более высокими затратами из-за особенностей производства. Аналитическая хроматография обычно выполняется с небольшим количеством вещества и предназначена для определения наличия или измерения относительного содержания аналитов в смеси. Эти два типа не исключают друг друга.

Этимология и произношение

Хроматография, произносится как /k/r/əʊ/m/ə/'t/ɒ/g/r/ə/f/i/, происходит от греческого χρῶμα chroma, что означает «цвет», и γράφειν graphein, что означает «писать». Сочетание этих двух терминов напрямую восходит к изобретению метода, впервые применённого для разделения пигментов.

История

Хроматография была впервые разработана в Казанском университете российским ученым итальянского происхождения Михаилом Цветом в 1900 году. Он разработал эту технику и ввел термин "хроматография" в первом десятилетии XX века, главным образом для разделения растительных пигментов, таких как хлорофилл, каротины и ксантофиллы. Поскольку эти компоненты разделялись в виде полос различных цветов (зеленого, оранжевого и желтого соответственно), это напрямую послужило вдохновением для названия техники. Новые типы хроматографии, разработанные в 1930-х и 1940-х годах, сделали эту технику полезной для многих процессов разделения. Техника хроматографии значительно усовершенствовалась благодаря работам Арчера Джона Портера Мартина и Ричарда Лоуренса Миллингтона Синге в 1940-х и 1950-х годах, за которые они были удостоены Нобелевской премии по химии в 1952 году. Они заложили основы принципов и базовых методов распределительной хроматографии, а их работа стимулировала быстрое развитие нескольких хроматографических методов: бумажной хроматографии, газовой хроматографии и того, что впоследствии стало известно как высокоэффективная жидкостная хроматография. С тех пор технология быстро развивается. Исследователи обнаружили, что основные принципы хроматографии Цвета могут быть применены различными способами, что привело к появлению различных вариантов хроматографии, описанных ниже. Усовершенствования постоянно повышают технические характеристики хроматографии, позволяя разделять все более схожие молекулы.

Условия

Аналит – вещество, которое необходимо разделить в процессе хроматографии. Обычно это и есть целевой компонент смеси. Аналитическая хроматография – использование хроматографии для определения наличия и, возможно, концентрации аналита(ов) в образце. Связанная фаза – стационарная фаза, ковалентно связанная с носителем или внутренней стенкой колонки. Хроматограмма – визуальное представление результатов, полученных на хроматографе. При оптимальном разделении различные пики или паттерны на хроматограмме соответствуют различным компонентам разделенной смеси. По оси x откладывается время удерживания, по оси y – сигнал (например, полученный с помощью спектрофотометра, масс-спектрометра или других детекторов), соответствующий ответу, создаваемому аналитами при выходе из системы. В оптимальной системе сигнал пропорционален концентрации разделенного аналита. Хроматограф – прибор, обеспечивающий сложное разделение, например, газовую или жидкостную хроматографию. Хроматография – физический метод разделения, основанный на распределении компонентов между двумя фазами: стационарной (стационарной фазой) и подвижной (мобильной фазой), движущейся в определенном направлении. Элюент (иногда элюант) – растворитель или смесь растворителей, используемых в элюционной хроматографии, является синонимом мобильной фазы. Элюат – смесь растворенного вещества (см. Элюируемое вещество) и растворителя (см. Элюент), выходящая из колонки. В 1978 году У. Кларк Стилл предложил модифицированную версию колонной хроматографии, названную быстродействующей колонной хроматографией (flash-хроматография). Эта техника очень похожа на традиционную колонную хроматографию, за исключением того, что растворитель пропускается через колонку под давлением. Это позволило проводить большинство разделений менее чем за 20 минут, с улучшенными результатами по сравнению с прежним методом. Современные системы быстродействующей хроматографии продаются в виде предварительно упакованных пластиковых картриджей, через которые прокачивается растворитель. Системы могут быть оснащены детекторами и фракционными коллекторами, обеспечивающими автоматизацию. Использование градиентных насосов позволило ускорить разделение и снизить расход растворителей. В хроматографии на расширенном слое используется подвижный слой вместо твердой фазы, сформированной упакованным слоем. Это позволяет исключить предварительные этапы очистки, такие как центрифугирование и фильтрация, для культурных сред или суспензий разрушенных клеток. Фосфоцеллюлозная хроматография использует способность многих ДНК-связывающих белков связываться с фосфоцеллюлозой. Чем сильнее взаимодействие белка с ДНК, тем более высокая концентрация соли необходима для элюирования этого белка.

Плановая хроматография

Планарная хроматография — это метод разделения, в котором стационарная фаза представлена в виде плоскости или нанесена на плоскость. Эта плоскость может быть бумагой, используемой как таковой, или пропитанной веществом, образующим стационарную фазу (бумажная хроматография), либо слоем твердых частиц, распределенных на подложке, например, стеклянной пластине (тонкослойная хроматография). Различные соединения в смеси образца перемещаются на разные расстояния в зависимости от силы их взаимодействия со стационарной фазой по сравнению с подвижной фазой. Специфический коэффициент удерживания (Rf) каждого вещества может быть использован для идентификации неизвестного соединения.

Хроматография на бумаге

Бумажная хроматография — это метод, который заключается в нанесении небольшого пятна или линии раствора образца на полоску хроматографической бумаги. Бумага помещается в ёмкость с небольшим количеством растворителя и герметично закрывается. По мере подъёма растворителя по бумаге он достигает смеси образца, которая начинает перемещаться вверх по бумаге вместе с растворителем. Эта бумага изготовлена из целлюлозы — полярного вещества, и компоненты смеси продвигаются дальше, если они менее полярны. Более полярные вещества быстрее связываются с целлюлозной бумагой и поэтому перемещаются на меньшее расстояние.

Тонкослойная хроматография (TLC)

Тонкослойная хроматография (ТЛХ) — широко используемая лабораторная техника, применяемая для разделения различных биохимических веществ на основе их относительного сродства к стационарной и подвижной фазам. Она аналогична бумажной хроматографии. Однако вместо использования бумаги в качестве стационарной фазы, в ТЛХ используется тонкий слой адсорбента, такого как силикагель, оксид алюминия или целлюлоза, нанесенный на плоскую инертную основу. ТЛХ очень универсальна: на одном слое можно одновременно разделять несколько образцов, что делает ее незаменимой для скрининговых исследований, например, для определения концентрации лекарственных средств и оценки чистоты воды. Вероятность перекрестного загрязнения невелика, поскольку каждое разделение проводится на новом слое. По сравнению с бумажной хроматографией, ТЛХ обеспечивает более быстрое разделение, лучшую сепарацию, более точный количественный анализ и возможность выбора различных адсорбентов. Для достижения еще более высокого разрешения и ускорения разделения с меньшим расходом растворителя можно использовать высокоэффективную ТЛХ. Ранее ТЛХ широко использовалась для дифференциации хромосом путем определения расстояния, пройденного ими в геле (разделение хромосом было отдельным этапом).

Газовая хроматография

Газовая хроматография (ГХ), также иногда известная как газо-жидкостная хроматография (ГЖХ), является методом разделения, в котором подвижная фаза представляет собой газ. Газохроматографическое разделение всегда осуществляется в колонке, которая обычно бывает «наполненной» или «капиллярной». Наполненные колонки являются основным инструментом газовой хроматографии, поскольку они дешевле, проще в использовании и часто обеспечивают достаточную эффективность. Капиллярные колонки обычно обеспечивают значительно более высокое разрешение, и хотя они дороже, они все шире используются, особенно для анализа сложных смесей. Кроме того, капиллярные колонки подразделяются на три класса: колонки с пористым слоем открытой трубки (PLOT), колонки с покрытием стенок открытой трубки (WCOT) и колонки с покрытием на носителе открытой трубки (SCOT). Колонки PLOT уникальны тем, что стационарная фаза адсорбирована на стенках колонки, в то время как в колонках WCOT стационарная фаза химически связана со стенками. Колонки SCOT, в некотором смысле, представляют собой комбинацию двух вышеупомянутых типов, поскольку они содержат частицы носителя, прикрепленные к стенкам колонки, на которых, в свою очередь, химически связана жидкая фаза. Оба типа колонок изготавливаются из неадсорбирующих и химически инертных материалов. Для наполненных колонок обычно используются нержавеющая сталь и стекло, а для капиллярных – кварц или плавленый кремнезем. Газовая хроматография основана на равновесии распределения аналита между твердой или вязкой жидкой стационарной фазой (часто представляющей собой силиконовый материал) и подвижным газом (чаще всего гелием). Стационарная фаза наносится на внутреннюю поверхность трубки малого диаметра (обычно 0,53–0,18 мм внутреннего диаметра) из стекла или плавленного кремнезема (капиллярная колонка) или на твердый носитель внутри более широкой металлической трубки (наполненная колонка). Она широко используется в аналитической химии; однако высокие температуры, применяемые в ГХ, делают ее непригодной для анализа биополимеров или белков с высокой молекулярной массой (которые денатурируют при нагревании), часто встречающихся в биохимии, но она хорошо подходит для применения в нефтехимической промышленности, мониторинге и восстановлении окружающей среды, а также в области промышленной химии. Она также широко используется в химических исследованиях.

Жидкая хроматография

Жидкая хроматография (LC) – это метод разделения, в котором подвижная фаза является жидкостью. Проведение может осуществляться как в колонке, так и в плоскости. Современная жидкая хроматография, как правило, использующая очень мелкие сорбционные частицы и относительно высокое давление, называется высокоэффективной жидкостной хроматографией. В ВЭЖХ (HPLC) образец под давлением жидкости (подвижной фазы) пропускается через колонку, заполненную стационарной фазой, состоящей из частиц неправильной или сферической формы, пористого монолитного слоя или пористой мембраны. Монолиты – это "губчатые хроматографические материалы", представляющие собой непрерывный блок органических или неорганических компонентов. Исторически ВЭЖХ делится на два основных подкласса в зависимости от полярности подвижной и стационарной фаз. Методы, в которых стационарная фаза более полярна, чем подвижная фаза (например, толуол в качестве подвижной фазы и силикагель в качестве стационарной фазы), называются жидкостной хроматографией нормальной фазы (NPLC), а обратные системы (например, смесь метанола и воды в качестве подвижной фазы и C18 в качестве стационарной фазы) – жидкостной хроматографией с обратной фазой (RPLC).

Суперкритическая жидкостная хроматография

Суперкритическая жидкостная хроматография — это метод разделения, в котором подвижная фаза представляет собой флюид, находящийся выше и вблизи своей критической температуры и давления. Конкретные методы, относящиеся к этому широкому направлению, перечислены ниже.

Афинитетная хроматография

Аффинная хроматография основана на селективном нековалентном взаимодействии между аналитом и специфическими молекулами. Она очень специфична, но не отличается высокой устойчивостью. Часто используется в биохимии для очистки белков, связанных с тегами. Эти белки-слияния маркируются соединениями, такими как His-теги, биотин или антигены, которые специфически связываются со стационарной фазой. После очистки эти теги обычно удаляются, и получают чистый белок. Аффинная хроматография часто использует сродство биомолекулы к металлу (Zn, Cu, Fe и т.д.). Колонки часто готовятся вручную и могут быть разработаны специально для интересующих белков. Традиционные аффинные колонки используются в качестве подготовительной стадии для удаления нежелательных биомолекул или в качестве первичной стадии при анализе белка с неизвестными физическими свойствами. Однако существуют методы жидкостной хроматографии, которые используют свойства аффинной хроматографии. Иммобилизованная металл-аффинная хроматография (IMAC) полезна для разделения вышеупомянутых молекул на основе относительного сродства к металлу. Часто эти колонки можно загружать различными металлами для создания колонки с заданным сродством.

Ионно-обменная хроматография

Ионно-обменная хроматография (обычно называемая ионной хроматографией) использует ионно-обменный механизм для разделения аналитов на основе их заряда. Обычно проводится в колонках, но также может быть полезна и в планшетном режиме. Ионно-обменная хроматография использует заряженную стационарную фазу для разделения заряженных соединений, включая анионы, катионы, аминокислоты, пептиды и белки. В традиционных методах стационарная фаза представляет собой ионообменную смолу, содержащую заряженные функциональные группы, которые взаимодействуют с противоположно заряженными группами анализируемого соединения для его удержания. Существуют два типа ионно-обменной хроматографии: катионный обмен и анионный обмен. В катионно-обменной хроматографии стационарная фаза имеет отрицательный заряд, а обмениваемый ион является катионом, в то время как в анионно-обменной хроматографии стационарная фаза имеет положительный заряд, а обмениваемый ион является анионом. Ионно-обменная хроматография широко используется для очистки белков с помощью FPLC.

Размерная хроматография

Хроматография исключения размера (SEC), также известная как гель-проникающая хроматография (GPC) или гель-фильтрационная хроматография, разделяет молекулы в соответствии с их размером (или, точнее, с их гидродинамическим диаметром или гидродинамическим объемом). Меньшие молекулы способны проникать в поры сорбента, в результате чего они задерживаются и удаляются из потока подвижной фазы. Среднее время пребывания в порах зависит от эффективного размера молекул аналита. Однако молекулы, размер которых превышает средний размер пор сорбента, не проникают в поры и практически не задерживаются, элюируясь первыми. Как правило, это хроматографический метод с невысоким разрешением, поэтому он часто используется на заключительном, "полирующем" этапе очистки. Он также полезен для определения третичной и четвертичной структуры очищенных белков, особенно поскольку его можно проводить в условиях, близких к естественным.

Расширенное адсорбционное хроматографическое разделение

Расширенная колона хроматографической адсорбции (EBA) для биохимического процесса разделения включает в себя распределитель жидкости для выравнивания давления с функцией самоочистки, расположенный под пористой удерживающей ситовой пластиной в нижней части расширенного слоя, узел сопел верхней части с функцией обратной промывки в верхней части расширенного слоя, а также улучшенное распределение исходного раствора, подаваемого в расширенный слой, обеспечивающее состояние поршневого потока жидкости, проходящей через слой. Расширенный слой демонстрирует состояние поршневого потока. Хроматографическая колонна для разделения с расширенным слоем обладает преимуществами, повышающими эффективность разделения. Расширенная адсорбционная хроматография (EBA) – удобная и эффективная методика выделения белков непосредственно из неосветленного сырого образца. В хроматографии EBA осажденный слой сначала расширяется восходящим потоком выравнивающего буфера. Затем сырье, представляющее собой смесь растворимых белков, примесей, клеток и клеточного детрита, пропускается вверх через расширенный слой. Целевые белки захватываются на адсорбенте, а частицы и примеси проходят сквозь него. Переход к элюирующему буферу при сохранении восходящего потока приводит к десорбции целевого белка в режиме расширенного слоя. В качестве альтернативы, при изменении направления потока адсорбированные частицы быстро оседают, и белки могут быть десорбированы элюирующим буфером. Выбор режима элюирования (расширенный или осажденный слой) зависит от характеристик сырья. После элюирования адсорбент очищается предварительно определенным моющим раствором (CIP), после чего следует регенерация колонки (для дальнейшего использования) или ее хранение.

Хроматография с обратной фазой

Обратная фазовая хроматография (RPC) – это любая процедура жидкостной хроматографии, в которой подвижная фаза значительно более полярна, чем стационарная фаза. Она получила такое название, поскольку в нормальной фазовой хроматографии подвижная фаза значительно менее полярна, чем стационарная фаза. Гидрофобные молекулы в подвижной фазе склонны адсорбироваться на относительно гидрофобной стационарной фазе. Гидрофильные молекулы в подвижной фазе будут элюироваться первыми. Разделительные колонки обычно состоят из углеродной цепи C8 или C18, ковалентно связанной с основой из частиц диоксида кремния.

Гидрофобная взаимодействующая хроматография

Гидрофобная взаимодействующая хроматография (HIC) – это метод очистки и анализа, который разделяет аналиты, такие как белки, на основе гидрофобных взаимодействий между аналитом и хроматографической матрицей. Она может обеспечить не денатурирующий, ортогональный подход к разделению в обращенной фазе, сохраняя нативные структуры и потенциальную активность белков. В гидрофобной взаимодействующей хроматографии матричный материал слабо замещен гидрофобными группами. Эти группы могут включать метильные, этильные, пропильные, бутильные, октильные или фенильные группы. При высоких концентрациях соли неполярные боковые цепи на поверхности белков «взаимодействуют» с гидрофобными группами; то есть, оба типа групп исключаются полярным растворителем (гидрофобные эффекты усиливаются повышенной ионной силой). Таким образом, образец наносится на колонку в высокополярном буфере, что способствует ассоциации гидрофобных участков аналита со стационарной фазой. Элюент обычно представляет собой водный буфер с уменьшающейся концентрацией соли, возрастающей концентрацией детергента (который нарушает гидрофобные взаимодействия) или изменением pH. Критически важным является тип используемой соли, при этом космотропные соли, определенные рядом Хофмейстера, обеспечивают наибольшую структурированность воды вокруг молекулы и, как следствие, гидрофобное давление. Сульфат аммония часто используется для этой цели. Добавление органических растворителей или других менее полярных компонентов может способствовать улучшению разрешения. В целом, гидрофобная взаимодействующая хроматография (HIC) выгодна, если образец чувствителен к изменению pH или жестким растворителям, обычно используемым в других типах хроматографии, но не к высоким концентрациям соли. Как правило, варьируется количество соли в буфере. В 2012 году Мюллер и Францреб описали влияние температуры на HIC, используя бычий сывороточный альбумин (BSA) с четырьмя различными типами гидрофобной смолы. В исследовании изменялась температура для воздействия на аффинность связывания BSA с матрицей. Было заключено, что цикличное изменение температуры от 50 до 10 градусов не будет достаточным для эффективного удаления всего BSA с матрицы, но может быть очень эффективным, если колонка будет использоваться лишь несколько раз. Использование температуры для достижения изменения позволяет лабораториям снизить затраты на покупку соли и сэкономить средства. Если необходимо избежать высоких концентраций соли и колебаний температуры, можно использовать более гидрофобный компонент для конкуренции с образцом и его элюирования. [источник] Этот так называемый метод HIC, не зависящий от соли, показал возможность прямой изоляции человеческого иммуноглобулина G (IgG) из сыворотки с удовлетворительным выходом, используя бета-циклодекстрин в качестве конкурента для вытеснения IgG с матрицы. Это значительно расширяет возможности использования HIC с образцами, чувствительными к соли, поскольку известно, что высокие концентрации соли вызывают осаждение белков.

Гидродинамическая хроматография

Гидродинамическая хроматография (HDC) основана на наблюдаемом явлении, что крупные капли движутся быстрее, чем мелкие. В колонке это происходит потому, что центр масс более крупных капель не может приближаться к стенкам колонны так же, как у мелких капель, из-за их большего общего размера. Более крупные капли элюируют первыми из центра колонки, а мелкие капли задерживаются у стенок колонки и элюируют последними. Этот вид хроматографии полезен для разделения аналитов по молярной массе, размеру, форме и структуре при использовании совместно с детекторами рассеяния света, вискозиметрами и рефрактометрами. Два основных типа HDC – открытая трубка и колонки с наполнением. Открытая трубка обеспечивает быстрое разделение для малых частиц, в то время как HDC с колонками с наполнением может повысить разрешение и лучше подходит для частиц со средней молекулярной массой, превышающей далтон. HDC отличается от других видов хроматографии тем, что разделение происходит только в интерстициальном объеме – объеме, окружающем и находящемся между частицами в колонке с наполнением. HDC имеет тот же порядок элюирования, что и гель-проникающая хроматография (SEC), но эти два процесса все же различаются во многих аспектах. Это во многом связано с тем, что SEC является более деструктивным методом из-за пор в колонке, которые разрушают аналит в процессе разделения, что влияет на распределение по массе. HDC играет особенно важную роль в области микрофлюидики. Первое успешное устройство для HDC на чипе было предложено Chmela и соавторами в 2002 году. Их конструкция позволила добиться разделения, используя канал длиной 80 мм за 3 минуты для частиц диаметром от 26 до 110 нм, однако авторы отметили необходимость улучшения параметров удерживания и дисперсии. Наличие такого короткого канала и высокого разрешения было особенно впечатляющим, учитывая, что в предыдущих исследованиях использовались каналы длиной 80 мм. Это исследование также способствовало повышению экологической устойчивости микрофлюидики благодаря отсутствию внешней электроники, управляющей потоком, что стало преимуществом использования устройства, основанного на гравитации.

Двумерная хроматография

В некоторых случаях селективности, обеспечиваемой использованием одной колонки, может быть недостаточно для разделения аналитов в сложных образцах. Двумерная хроматография направлена на повышение разрешения этих пиков за счет использования второй колонки с различными физико-химическими (химической классификацией) свойствами. Поскольку механизм удержания на этой новой стационарной фазе отличается от механизма разделения в первом измерении, двумерная хроматография позволяет разделить соединения, которые неразличимы при одномерном разделении. Более того, разделение во втором измерении происходит быстрее, чем в первом, при этом для разделения во втором измерении выбираются определенные области интереса, полученные в первом измерении, или используется всесторонний подход.

Гидродинамическая хроматография с обратным током (CCC)

Принцип работы прибора CCC требует колонны, состоящей из открытой трубки, намотанной на бобину. Бобина вращается в двойном осевом кардиоидном движении, что создает переменное гравитационное поле (G), воздействующее на колонну во время каждого оборота. Это движение обеспечивает один этап разделения за оборот, и компоненты пробы разделяются в колонне благодаря их коэффициенту распределения между двумя несмешивающимися жидкими фазами. В настоящее время существует множество типов CCC, включая HSCCC (High Speed CCC) и HPCCC (High Performance CCC). HPCCC – это новейшая и наиболее эффективная версия прибора, доступная на данный момент.

Центробежная раздельная хроматография (ЦПХ)

В приборе ЦРХ (центрифуговая раздельная хроматография или гидростатическая противоточная хроматография) колонка состоит из серии ячеек, соединенных каналами, прикрепленными к ротору. Этот ротор вращается вокруг своей центральной оси, создавая необходимое центробежное поле для удержания стационарной фазы. Процесс разделения в ЦРХ определяется исключительно распределением растворенных веществ между стационарной и подвижной фазами, что легко описывается с использованием коэффициентов распределения (KD) этих веществ. Приборы ЦРХ доступны в коммерческой продаже для лабораторных, пилотных и промышленных масштабов разделения, с колонками различного объема – от примерно 10 миллилитров до 10 литров.

Периодическая хроматография с противоположным током

В отличие от хроматографии с обратным током (см. выше), периодическая хроматография с обратным током (PCC) использует твердую стационарную фазу и только жидкую подвижную фазу. Таким образом, она гораздо больше похожа на обычную аффинную хроматографию, чем на хроматографию с противотоком. В PCC используются несколько колонн, которые во время фазы загрузки соединяются последовательно. Этот режим позволяет перегружать первую колонну в этой последовательности без потери продукта, который уже начинает вымываться из колонны до полной насыщения сорбента. Продукт, вымывающийся из первой колонны, захватывается последующими колоннами. На следующем этапе колонны отсоединяются друг от друга. Первая колонка промывается и элюируется, в то время как остальные колонны продолжают загружаться. После того, как (первоначально) первая колонка восстановлена до равновесия, она вновь включается в поток загрузки, но уже в качестве последней колонны. Затем процесс продолжается циклически.

Хиральная хроматография

Хиральная хроматография включает в себя разделение стереоизомеров. В случае энантиомеров, они не имеют химических или физических различий, за исключением того, что являются трехмерными зеркальными отражениями друг друга. Для осуществления хирального разделения либо подвижная фаза, либо стационарная фаза должны быть хиральными, что приводит к различной аффинности к анализируемым веществам. Коммерчески доступны колонки для ВЭЖХ с хиральной стационарной фазой как для нормальной, так и для обращенно-фазной хроматографии. Традиционные хроматографические методы не способны разделять рацемические смеси энантиомеров. Однако в некоторых случаях нерацемические смеси энантиомеров могут неожиданно разделяться с помощью обычной жидкостной хроматографии (например, ВЭЖХ без хиральной подвижной или стационарной фазы).

Хроматография нормальной фазы в водной среде

Для хроматографии водной нормальной фазы (ВНФ) характерно элюирование, типичное для классического режима нормальной фазы (то есть, когда подвижная фаза значительно менее полярна, чем стационарная фаза), при котором вода является одним из компонентов системы растворителей подвижной фазы. В отличие от жидкостной хроматографии с гидрофильным взаимодействием (HILIC), механизм удержания в ВНФ основан на адсорбции, а не на распределении.

Приложения

Хроматография используется во многих областях, включая фармацевтическую промышленность, пищевую и напитковую промышленность, химическую промышленность, криминалистику, анализ окружающей среды и здравоохранение.