Введение
Микроскопическое исследование ткани для изучения и диагностики заболеваний – это предмет изучения журнала Histopathology (образовано от трех греческих слов: ἱστός histos «ткань», πάθος pathos «страдание» и λογία logia «изучение»). Гистопатология – это микроскопическое исследование ткани с целью изучения проявлений болезни. В клинической медицине гистопатология подразумевает исследование биопсии или хирургического материала патологоанатомом после соответствующей обработки образца и получения гистологических срезов, помещенных на стеклянные предметные стекла. В отличие от этого, цитопатология изучает отдельные клетки или микрофрагменты ткани (например, в виде «клеточных блоков»).
the journal
Histopathology (compound of three Greek words: ἱστός histos 'tissue', πάθος pathos 'suffering', and λογία logia 'study of') is the microscopic examination of tissue in order to study the manifestations of disease. Specifically, in clinical medicine, histopathology refers to the examination of a biopsy or surgical specimen by a pathologist, after the specimen has been processed and histological sections have been placed onto glass slides. In contrast, cytopathology examines free cells or tissue micro fragments (as "cell blocks
").
Сбор тканей
Гистопатологическое исследование тканей начинается с хирургического вмешательства, биопсии или аутопсии. Ткань удаляется из организма или растения, а затем, часто после экспертного рассечения в свежем состоянии, помещается в фиксатор, который стабилизирует ткани для предотвращения их разложения. Наиболее распространенным фиксатором является 10% нейтральный забуференный формалин (что соответствует 3,7% мас./об. формальдегида в нейтральной буферной воде, например, в фосфатно-солевом буфере).
Подготовка к гистологии
Затем ткань подготавливают для исследования под микроскопом с помощью химической фиксации или криорезки. Если предоставлен большой образец, например, полученный в ходе хирургического вмешательства, патолог осматривает образец ткани и выбирает часть, наиболее вероятно позволяющую поставить полезный и точный диагноз – эта часть удаляется для исследования в процессе, обычно называемом грубой обработкой или рассечением. Более крупные образцы разрезают, чтобы правильно расположить их анатомические структуры в кассете. Некоторые образцы (особенно биопсии) могут быть предварительно залиты агаром для обеспечения правильной ориентации ткани в кассете, а затем в блоке и, наконец, на диагностическом микроскопическом препарате. После этого образец помещают в пластиковую кассету на большую часть дальнейшего процесса.
Химическая фиксация
Помимо формалина, использовались и другие химические фиксаторы. Однако, с развитием иммуногистохимического окрашивания (IHC) и диагностического молекулярно-патологического тестирования, проводимого на этих образцах, формалин стал стандартным химическим фиксатором в диагностической гистопатологии человека. Время фиксации для очень маленьких образцов сокращено, и в диагностической гистопатологии человека существуют установленные нормы.
Обработка
Вода удаляется из образца последовательными этапами с использованием возрастающих концентраций спирта. Ксилен используется в последней фазе обезвоживания вместо спирта, поскольку воск, используемый на следующем этапе, растворим в ксилене, но не в спирте, что обеспечивает проницаемость (инфильтрацию) воска в образец. В последнее время антитела стали использовать для окрашивания определенных белков, липидов и углеводов. Этот метод, называемый иммуногистохимией, значительно расширил возможности специфической идентификации категорий клеток под микроскопом. К другим передовым методам относится in situ гибридизация для идентификации специфических молекул ДНК или РНК. Эти методы окрашивания антителами часто требуют использования криогистологии (гистологии замороженных срезов). Все вышеперечисленные процедуры выполняются в лаборатории с высокой точностью и под строгим контролем обученного специалиста медицинской лаборатории (гистолога). Цифровые камеры все чаще применяются для получения гистопатологических изображений.
При инфаркте миокарда
После инфаркта миокарда (сердечного приступа) в течение первых ~30 минут гистопатологические изменения не выявляются. Единственным возможным признаком в первые 4 часа является волнистость волокон по краю зоны поражения. Однако впоследствии развивается коагуляционный некроз с развитием отека и кровоизлияний. Через 12 часов можно наблюдать кариопикноз и гипереозинофилию миоцитов с некрозом сократительного кольца по краям, а также начало инфильтрации нейтрофилов. В течение 1–3 дней продолжается коагуляционный некроз с потерей ядер и поперечной исчерченности, и усиливается инфильтрация нейтрофилов в интерстиций. До конца первой недели после инфаркта начинается дезинтеграция погибших мышечных волокон, некроз нейтрофилов и начало фагоцитоза мертвых клеток макрофагами по краю зоны поражения, что прогрессирует в последующие дни. Через неделю также начинается формирование грануляционной ткани по краям, которая созревает в течение следующего месяца, характеризуясь увеличением отложения коллагена и снижением клеточности, пока рубцовая ткань миокарда полностью не сформируется примерно через 2 месяца после инфаркта.