Введение
Радиоиммуноанализ (РИА) – это иммуноанализ, использующий радионуклидно меченые молекулы в процессе последовательного формирования иммунных комплексов. РИА – высокочувствительный in vitro метод, применяемый для измерения концентрации веществ, как правило, концентрации антигенов (например, уровень гормонов в крови) с помощью антител. Несмотря на высокую чувствительность и специфичность метода РИА, требующего специализированного оборудования, он остается одним из наиболее экономичных способов проведения подобных измерений. Его применение требует особых мер предосторожности и лицензирования, поскольку используются радиоактивные вещества. В отличие от него, иммунорадиометрический анализ (ИРМА) – это иммуноанализ, использующий радионуклидно меченые молекулы, но не последовательно, а сразу. Радиоаллергосорбционный тест (РАСТ) является примером радиоиммуноанализа и используется для выявления причинного аллергена при аллергии.
A radioimmunoassay (RIA) is an immunoassay that uses radiolabeled molecules in a stepwise formation of immune complexes. A RIA is a very sensitive in vitro assay technique used to measure concentrations of substances, usually measuring antigen concentrations (for example, hormone levels in blood) by use of antibodies. Although the RIA technique is extremely sensitive and extremely specific, requiring specialized equipment, it remains among the least expensive methods to perform such measurements. It requires special precautions and licensing, since radioactive substances are used. In contrast, an immunoradiometric assay (IRMA) is an immunoassay that uses radiolabeled molecules but in an immediate rather than stepwise way. A radioallergosorbent test (RAST) is an example of radioimmunoassay. It is used to detect the causative allergen for an allergy.
Метод
Классически, для проведения радиоиммуноанализа, известное количество антигена делают радиоактивным, часто путем мечения гамма-радиоактивными изотопами йода, такими как 125I, или тритием, присоединенным к тирозину. Этот радиоактивно меченый антиген затем смешивают с известным количеством антитела к данному антигену, в результате чего они специфически связываются друг с другом. Далее добавляют образец сыворотки пациента, содержащий неизвестное количество того же антигена. Это вызывает конкуренцию между немеченым ("холодным") антигеном из сыворотки и радиомеченым ("горячим") антигеном за сайты связывания с антителом. С увеличением концентрации "холодного" антигена, большее его количество связывается с антителом, вытесняя радиомеченый вариант и снижая соотношение антигена, связанного с антителом, к свободному радиомеченому антигену. Затем связанные антигены отделяют, и измеряют радиоактивность свободного (несвязанного) антигена, оставшегося в супернатанте, с помощью гамма-счетчика. Полученное значение сравнивают со стандартизованной калибровочной кривой для определения концентрации немеченого антигена в образце сыворотки пациента. Радиоиммуноанализ способен обнаруживать несколько пикограммов аналита в экспериментальных пробирках при использовании антител с высокой аффинностью.
История
Этот метод был разработан Соломоном Берсоном и Розалин Суссман Ялоу в больнице Управления по делам ветеранов в Бронксе, Нью-Йорк. Это революционное достижение принесло доктору Ялоу Нобелевскую премию по физиологии и медицине в 1977 году, и она стала второй женщиной, удостоенной этой награды. В своей речи доктор Ялоу сказала: "Мир не может позволить себе терять таланты половины своего населения, если мы хотим решить множество проблем, с которыми сталкиваемся". Ялоу разделила Нобелевскую премию с Роджером Гильемином и Эндрю Шалли, которые были отмечены за исследования в области "производства пептидных гормонов мозгом".