Введение
Быстрая процедура гистологического секционирования
Процедура замороженных срезов – это патологолабораторная процедура для быстрого микроскопического анализа образца. Чаще всего она используется в онкологической хирургии. Техническое название этой процедуры – криосекция. Микротомное устройство, которое делает тонкие срезы замороженной ткани, называется криотомом. Качество препаратов, полученных методом замораживания, обычно ниже, чем у препаратов, изготовленных из тканей, фиксированных формалином и залитых в парафин. Хотя во многих случаях можно поставить диагноз, для более точной диагностики во многих случаях предпочтительна обработка фиксированной ткани. Внутриоперационная консультация – это термин, обозначающий все действия патолога, включающие не только изготовление замороженных срезов, но и макроскопическую оценку образца, исследование цитологических препаратов, полученных из образца (например, отпечатков), и разделение образца на части для специальных исследований (например, методов молекулярной патологии, проточной цитометрии). Отчет патолога часто ограничивается заключением "доброкачественное" или "злокачественное" и передается хирургу по внутренней связи. При операции по поводу ранее подтвержденного злокачественного новообразования основная задача патолога – сообщить хирургу, свободен ли край резекции от остаточной опухоли, или же на крае резекции присутствуют остаточные опухолевые клетки. Обычно для обработки используется метод "хлебного нарезания". Однако хирургия с контролем границ (CCPDMA) может выполняться с использованием различных методов нарезания и монтажа тканей, включая хирургию Моса.
История
Процедура замороженных срезов, как она практикуется сегодня в медицинских лабораториях, основана на описании, сделанном доктором Луисом Б. Уилсоном в 1905 году. Уилсон разработал эту технику по просьбе доктора Уильяма Майо, хирурга и одного из основателей клиники Майо, опираясь на более ранние публикации. Более ранние работы доктора Томаса С. Каллена из больницы Джона Хопкинса в Балтиморе также включали использование замороженных срезов, но только после фиксации формалином. Патолог доктор Уильям Уэлч, также работавший в Хопкинсе, экспериментировал с методикой Каллена, но без каких-либо клинических результатов. Поэтому Уилсону обычно приписывают истинное новаторство в этой процедуре (Gal & Cagle, 2005).
Применение
Основным применением процедуры замороженного среза является исследование ткани во время хирургического вмешательства. Это может быть обусловлено различными причинами. При выполнении операции по Мосу это простой метод контроля хирургических границ образца в режиме реального времени. Если есть подозрение на метастазирование опухоли, образец предполагаемого метастаза направляется на криосекцию для подтверждения его природы. Это поможет хирургу определить, целесообразно ли продолжать операцию. Агрессивное хирургическое лечение обычно проводится только при наличии шанса на излечение пациента. Если опухоль метастазировала, хирургическое вмешательство обычно не является радикальным, и хирург выбирает более консервативную операцию или вовсе отказывается от резекции. Если опухоль была удалена, но неясно, свободен ли край резекции от опухолевых клеток, запрашивается внутриоперационная консультация для оценки необходимости дополнительной резекции с достижением чистых краев. При исследовании сторожевого лимфатического узла обнаружение опухолевой ткани в сторожевом узле является показанием к дальнейшей диссекции лимфатических узлов, в то время как доброкачественный узел позволяет избежать этой процедуры. Если операция носит исследовательский характер, быстрое исследование поражения может помочь установить возможную причину симптомов пациента. Однако важно отметить, что возможности патологоанатома сильно ограничены из-за низкого технического качества замороженных срезов. Окончательный диагноз редко ставится во время операции. В редких случаях криосекцию используют для выявления веществ, теряющихся при традиционной гистологической обработке, например, липидов. Также их можно использовать для обнаружения некоторых антигенов, маскируемых формалином. Криостат может быть представлен в виде небольшого портативного устройства весом менее , или большого стационарного устройства весом более . Всю гистологическую лабораторию можно разместить в одной портативной коробке, что делает гистологию замороженных срезов возможным инструментом в условиях ограниченных ресурсов.
Точность диагноза
В систематическом обзоре Кокрейна, опубликованном в 2016 году, был проанализирован весь комплекс исследований, оценивающих диагностическую точность замороженных срезов у женщин, которым проводилась операция по поводу подозрительного новообразования яичника. Обзор пришел к выводу, что при четко выраженных доброкачественных или злокачественных опухолях по результатам замороженного среза точность диагноза была высокой, что впоследствии подтверждалось стандартной биопсией. Однако, если по результатам замороженного среза диагностировалась пограничная опухоль, не подтверждающая и не исключающая рак, точность диагноза была ниже. Обзор предполагает, что в подобных ситуациях неопределенности хирурги могут рассмотреть возможность проведения дополнительной операции у этих пациенток во время первичного вмешательства, чтобы снизить потребность во второй операции, поскольку в среднем у каждой пятой из них впоследствии выявляли рак.
Ультракриотомические
Ультракриотом, который является устройством, очень похожим на криотом, позволяет получать ультратонкие срезы ткани, которые затем можно исследовать с помощью просвечивающей электронной микроскопии. Толщина среза ультракриотома составляет порядка нескольких десятков нанометров. Это позволяет изучать ультраструктурные свойства без заливки ткани в парафин, что способствует лучшей сохранности молекул.