Тестирование на ВИЧ: методы, риски и этические аспекты.

Тесты на ВИЧ: обнаружение антител, антигенов и РНК в сыворотке, слюне, моче. Высокая чувствительность для донорской крови. Диагностика СПИДа отдельно.

19 мин чтения

100%

Источник: Diagnosis of HIV/AIDS — Wikipedia

Сравнивайте с английским: нажмите на абзац — оригинал откроется в окне. Кнопка EN под абзацем показывает его прямо в тексте.

Содержание

Введение

Иммунологический тест

Тесты на ВИЧ используются для выявления вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вируса, вызывающего синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), в сыворотке, слюне или моче. Эти тесты могут обнаруживать антитела, антигены или РНК.

Диагноз СПИДа

СПИД диагностируется отдельно от ВИЧ.

Скрининг донорской крови и клеточных продуктов

Тесты, используемые для скрининга донорской крови и тканей, должны обеспечивать высокую степень уверенности в обнаружении ВИЧ при его наличии (то есть требуется высокая чувствительность). В странах Запада банки крови используют комбинацию тестов на антитела, антиген и нуклеиновые кислоты. По оценкам Всемирной организации здравоохранения, по состоянию на 2000 год, недостаточный скрининг крови привел к 1 миллиону новых случаев заражения ВИЧ во всем мире. В США Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов требует, чтобы вся донорская кровь проверялась на наличие ряда инфекционных заболеваний, включая ВИЧ-1 и ВИЧ-2, с использованием комбинации тестов на антитела (EIA) и более оперативного тестирования нуклеиновых кислот (NAT). Эти диагностические тесты сочетаются с тщательным отбором доноров. По состоянию на 2001 год риск заражения ВИЧ при переливании крови в США составлял примерно один случай на 2,5 миллиона переливаний.

Диагностика ВИЧ-инфекции

Тесты, используемые для диагностики ВИЧ-инфекции у конкретного человека, требуют высокой чувствительности и специфичности. В Соединенных Штатах этого достигают с помощью алгоритма, сочетающего два теста на антитела к ВИЧ. Если антитела обнаружены в ходе первичного теста, основанного на методе ELISA, то второй тест, использующий процедуру вестерн-блот, определяет размер антигенов в наборе реагентов, связывающихся с этими антителами. Комбинация этих двух методов обладает высокой точностью.

Конфиденциальность

Существует значительная полемика относительно этических обязательств медицинских работников информировать сексуальных партнеров ВИЧ-инфицированных лиц об их подверженности риску заражения. В некоторых юрисдикциях такое раскрытие информации разрешено, в других – нет. Все больше государственных центров тестирования используют конфиденциальные формы анализа. Это облегчает мониторинг инфицированных людей по сравнению с анонимным тестированием, где к положительным результатам анализа присваивается номер. Существуют разногласия в отношении вопросов конфиденциальности. В развивающихся странах домашнее тестирование и консультирование по ВИЧ (HBHTC) становится перспективным подходом к решению проблем конфиденциальности. HBHTC позволяет отдельным лицам, парам и семьям узнать свой ВИЧ-статус в комфорте и конфиденциальности домашней обстановки. Чаще всего используются экспресс-тесты на ВИЧ, результаты которых становятся доступны клиенту в течение 15–30 минут. Кроме того, при сообщении о положительном результате анализа на ВИЧ специалист по консультированию и тестированию может предложить соответствующие направления для профилактики, ухода и лечения.

Анонимное тестирование

Тестирование, при котором к образцу, направляемому на анализ, прикреплен только номер. К образцам с подтвержденным положительным результатом имя ВИЧ-инфицированного человека прикрепляться не будет. Организации, предоставляющие эту услугу, рекламируют такую возможность тестирования.

Анализы на антитела

Тесты на антитела к ВИЧ специально разработаны для проведения рутинного диагностического обследования взрослых; эти тесты недорогие и обладают высокой точностью.

Период окна

Анализы на антитела могут давать ложноотрицательные результаты (антитела не были обнаружены, несмотря на наличие ВИЧ) в течение "окна" – интервала от трех недель до шести месяцев между моментом заражения ВИЧ и выработкой обнаруживаемых антител к ВИЧ, что соответствует сероконверсии. У большинства людей обнаруживаемые антитела появляются примерно через 30 дней после заражения, хотя у некоторых сероконверсия происходит позже. Подавляющее большинство людей (97%) имеют обнаруживаемые антитела через три месяца после заражения ВИЧ; шестимесячное окно встречается крайне редко при использовании современных анализов на антитела. В течение "окна" инфицированный человек может передавать ВИЧ другим, даже если его ВИЧ-инфекция не обнаруживается при анализе на антитела. Антиретровирусная терапия, начатая в период "окна", может задержать выработку антител и увеличить продолжительность этого периода до 12 месяцев. Это не наблюдалось у пациентов, получавших постэкспозиционную профилактику (ПЭП). Эти пациенты должны проходить тестирование ELISA с различными интервалами после стандартного 28-дневного курса лечения, иногда за пределами консервативного шестимесячного периода "окна". Анализы на антитела также могут давать ложноотрицательные результаты у пациентов с X-связанной агаммаглобулинемией; в таких случаях следует использовать другие диагностические тесты. Зарегистрировано три случая задержки сероконверсии ВИЧ у медицинских работников; в этих случаях у них были отрицательные результаты на антитела к ВИЧ более чем через 6 месяцев после возможного заражения, но серопозитивные – в течение 12 месяцев после этого. В одном случае последовательность ДНК подтвердила источник инфекции. Две задержки сероконверсии были связаны с одновременным заражением вирусом гепатита С (ВГС). В одном случае сопутствующая инфекция ВГС привела к быстрому смертельному исходу; однако неизвестно, оказывает ли ВГС непосредственное влияние на риск или течение ВИЧ-инфекции, или является маркером других факторов, связанных с заражением.

ЭЛИСА

Энзимный иммуносорбентный анализ (ELISA) или ферментный иммуноанализ (EIA) был первым широко используемым скрининговым тестом для выявления ВИЧ. Он обладает высокой чувствительностью. В ходе анализа ELISA сыворотка человека разбавляется в 400 раз и наносится на планшет, к которому прикреплены антигены ВИЧ. Если в сыворотке присутствуют антитела к ВИЧ, они могут связаться с этими антигенами. Затем планшет промывают для удаления всех остальных компонентов сыворотки. Далее на планшет наносят специально подготовленное "вторичное антитело" – антитело, связывающееся с человеческими антителами, – после чего проводят повторное промывание. Это вторичное антитело предварительно химически конъюгировано с ферментом. Таким образом, количество фермента на планшете будет пропорционально количеству вторичных антител, связавшихся с планшетом. Затем добавляют субстрат для фермента, и каталитическая активность фермента приводит к изменению цвета или флуоресценции. Результаты ELISA представляются в виде числового значения; наиболее дискуссионным аспектом этого теста является определение порогового значения ("точки отсечения") для разграничения положительного и отрицательного результатов.

Донгл ELISA

Исследователи из Колумбийского университета разработали ELISA-тест в виде донгла, способный определять ВИЧ и сифилис. Он совместим с любым смартфоном или компьютером без дополнительной поддержки или внешнего источника питания и позволяет проанализировать каплю крови примерно за пятнадцать минут. Себестоимость производства каждого устройства составляет около 34 долларов.

Западный блот

Как и процедура ELISA, вестерн-блот является тестом для выявления антител. Однако, в отличие от метода ELISA, вирусные белки сначала разделяют и иммобилизуют. На последующих этапах визуализируется связывание сывороточных антител с конкретными белками ВИЧ. В частности, клетки, потенциально инфицированные ВИЧ, разрушают, а содержащиеся в них белки помещают в гель, через который пропускают электрический ток. Различные белки будут перемещаться в этом поле с разной скоростью, в зависимости от их размера, при этом поверхностно-активное вещество, называемое лаурилсульфатом натрия, выравнивает их электрический заряд. Некоторые коммерчески доступные наборы для вестерн-блота уже содержат белки ВИЧ, нанесенные на полоску ацетата целлюлозы. После достаточного разделения белков, их переносят на мембрану, и процедура продолжается аналогично ELISA: разбавленную сыворотку пациента наносят на мембрану, и антитела в сыворотке могут связываться с некоторыми белками ВИЧ. Антитела, которые не связались, смывают, а ферментно-меченые антитела, способные связываться с антителами пациента, определяют, к каким белкам ВИЧ у пациента есть антитела. Универсальных критериев для интерпретации вестерн-блота не существует: количество вирусных полос, которые должны присутствовать, может варьироваться. Если не обнаружено вирусных полос, результат считается отрицательным. Если присутствует хотя бы одна полоса для каждой из групп продуктов генов GAG, POL и ENV, результат считается положительным. Подход, основанный на трех продуктах генов, для интерпретации вестерн-блота не был принят в общественном здравоохранении или клинической практике. Тесты, в которых обнаружено меньше требуемого количества вирусных полос, сообщаются как неопределенные: пациенту с неопределенным результатом следует пройти повторное тестирование, поскольку последующие анализы могут быть более информативными. Почти у всех ВИЧ-инфицированных пациентов с неопределенными результатами вестерн-блота через месяц появится положительный результат; сохраняющиеся неопределенные результаты в течение шести месяцев указывают на то, что они не связаны с ВИЧ-инфекцией. В общей популяции со здоровым образом жизни и низким риском неопределенные результаты вестерн-блота встречаются примерно у 1 из 5000 пациентов. Однако для людей, подвергавшихся высокому риску заражения от лиц, у которых распространен ВИЧ-2 (например, в Западной Африке), неопределенный результат вестерн-блота может указывать на инфекцию ВИЧ-2. Белки ВИЧ, используемые в вестерн-блотинге, могут быть получены с помощью рекомбинантной ДНК в технике, называемой рекомбинантным иммуноблотом (RIBA).

Like the ELISA procedure, the western blot is an antibody detection test. However, unlike the ELISA method, the viral proteins are separated first and immobilized. In subsequent steps, the binding of serum antibodies to specific HIV proteins is visualized. Specifically, cells that may be HIV infected are opened and the proteins within are placed into a slab of gel, to which an electric current is applied. Different proteins will move with different speeds in this field, depending on their size, while their electrical charge is leveled by a surfactant called sodium lauryl sulfate. Some commercially prepared Western blot test kits contain the HIV proteins already on a cellulose acetate strip. Once the proteins are well separated, they are transferred to a membrane and the procedure continues similar to an ELISA: the person's diluted serum is applied to the membrane and antibodies in the serum may attach to some of the HIV proteins. Antibodies that do not attach are washed away, and enzyme linked antibodies with the capability to attach to the person's antibodies determine to which HIV proteins the person has antibodies. There are no universal criteria for interpreting the western blot test: The number of viral bands that must be present may vary. If no viral bands are detected, the result is negative. If at least one viral band for each of the GAG, POL, and ENV gene product groups are present, the result is positive. The three gene product approach to western blot interpretation has not been adopted for public health or clinical practice. Tests in which less than the required number of viral bands are detected are reported as indeterminate: a person who has an indeterminate result should be retested, as later tests may be more conclusive. Almost all HIV infected persons with indeterminate western blot results will develop a positive result when tested in one month; persistently indeterminate results over a period of six months suggests the results are not due to HIV infection. In a generally healthy low risk population, indeterminate results on western blot occur on the order of 1 in 5,000 patients. However, for those individuals who have had high risk exposures to individuals where HIV 2 is most prevalent, Western Africa, an inconclusive western blot test may prove infection with HIV 2. The HIV proteins used in western blotting can be produced by recombinant DNA in a technique called recombinant immunoblot assay (RIBA).

Быстрые тесты или тесты в пункте лечения

Быстрые тесты на антитела – это качественные иммуноанализы, предназначенные для использования в условиях оказания медицинской помощи на месте для содействия диагностике ВИЧ-инфекции. Эти тесты следует использовать с учетом клинической картины, анамнеза и факторов риска обследуемого человека. Прогностическая ценность быстрых тестов на антитела в группах населения с низким риском не оценивалась. Эти тесты должны применяться в рамках соответствующих многокомпонентных алгоритмов тестирования, разработанных для статистической валидации результатов быстрого тестирования на ВИЧ. Отсутствие антител к ВИЧ не означает, что человек не инфицирован ВИЧ. После заражения ВИЧ может потребоваться несколько месяцев, чтобы выработка антител достигла обнаруживаемых уровней, в течение которых быстрое тестирование на антитела к ВИЧ не будет отражать истинный инфекционный статус. У большинства людей антитела к ВИЧ достигают обнаруживаемого уровня через две-шесть недель после заражения. Несмотря на высокую специфичность этих тестов, ложноположительные результаты возможны. Любой положительный результат теста должен быть подтвержден в лаборатории методом вестерн-блот.

Интерпретация тестов на антитела

Одно только исследование методом ELISA не может использоваться для диагностики ВИЧ, даже если тест указывает на высокую вероятность наличия антител к ВИЧ-1. В Соединенных Штатах такие результаты ELISA не сообщаются как "положительные", если они не подтверждены вестерн-блотом. Тесты на антитела ELISA были разработаны для обеспечения высокой уверенности в том, что донорская кровь не инфицирована ВИЧ. Поэтому нельзя заключать, что кровь, отклоненная для переливания из-за положительного результата теста ELISA на антитела, действительно инфицирована ВИЧ. Иногда повторное тестирование донора через несколько месяцев дает отрицательный результат теста ELISA на антитела. Именно поэтому перед сообщением о "положительном" результате теста на ВИЧ всегда используется подтверждающий вестерн-блот. Редкие ложноположительные результаты, обусловленные факторами, не связанными с воздействием ВИЧ, встречаются при использовании ELISA чаще, чем при вестерн-блоте. Ложноположительные результаты могут быть связаны с такими состояниями, как недавние острые заболевания и аллергии. Вспышка ложноположительных тестов осенью 1991 года первоначально была связана с вакцинами против гриппа, использовавшимися в тот сезон, но дальнейшее исследование выявило перекрестную реакцию с несколькими относительно неспецифичными наборами для тестирования. Ложноположительный результат не свидетельствует о состоянии, представляющем значительный риск для здоровья. При комбинировании теста ELISA с вестерн-блотом частота ложноположительных результатов крайне низка, а диагностическая точность очень высока (см. ниже). Тесты на антитела к ВИЧ обладают высокой чувствительностью, то есть преимущественно реагируют с антителами к ВИЧ, но не все положительные или неопределенные результаты ELISA на ВИЧ означают, что человек инфицирован ВИЧ. При оценке необходимо учитывать анамнез риска и клиническое заключение, а также проводить подтверждающий тест (вестерн-блот). Лицу с неопределенным результатом следует пройти повторное тестирование через некоторое время.

Точность тестирования на ВИЧ

Современные тесты на ВИЧ обладают высокой точностью. Данные о рисках и преимуществах скрининга на ВИЧ были рассмотрены в июле 2005 года Рабочей группой по профилактике заболеваний в США. Авторы пришли к следующим выводам:

Указанный здесь показатель специфичности для недорогих иммуноферментных скрининговых тестов означает, что из 1000 результатов тестов на ВИЧ у здоровых людей примерно 15 будут ложноположительными. Подтверждение результата теста (то есть повторное проведение теста, если это возможно) может снизить вероятность ложноположительного результата примерно до 1 случая на 250 000 тестов. Показатель чувствительности, в свою очередь, указывает, что из 1000 результатов тестов у ВИЧ-инфицированных людей 3 окажутся ложноотрицательными. Однако, исходя из показателей распространенности ВИЧ в большинстве центров тестирования в Соединенных Штатах, отрицательная прогностическая ценность этих тестов чрезвычайно высока, что означает, что отрицательный результат теста будет верным более чем в 9997 случаях из 10 000 (99,97% случаев). Высокая отрицательная прогностическая ценность этих тестов является причиной того, что CDC рекомендует считать отрицательный результат теста убедительным доказательством отсутствия ВИЧ-инфекции у человека. Конечно, фактические цифры варьируются в зависимости от тестируемой популяции. Это связано с тем, что интерпретация результатов любого медицинского теста (при условии, что ни один тест не является на 100% точным) зависит от изначальной степени уверенности, или априорной вероятности того, что у человека есть или нет заболевание. Как правило, априорная вероятность оценивается на основе распространенности заболевания в популяции или в конкретном месте тестирования. Положительная и отрицательная прогностическая ценность всех тестов, включая тесты на ВИЧ, учитывают априорную вероятность заболевания вместе с точностью метода тестирования для определения новой степени уверенности в том, что у человека есть или нет заболевание (также известная как апостериорная вероятность). Вероятность того, что положительный тест точно указывает на ВИЧ-инфекцию, возрастает с увеличением распространенности или частоты ВИЧ-инфекции в популяции. И наоборот, отрицательная прогностическая ценность снижается при росте распространенности ВИЧ. Таким образом, положительный результат теста в группе высокого риска, например, у людей, часто практикующих незащищенный анальный секс с непостоянными партнерами, с большей вероятностью будет правильно отражать ВИЧ-инфекцию, чем положительный результат теста в группе очень низкого риска, например, у неоплачиваемых доноров крови. Многие исследования подтвердили точность современных методов тестирования на ВИЧ в Соединенных Штатах, сообщив о частоте ложноположительных результатов от 0,0004 до 0,0007 и ложноотрицательных результатов 0,003 в общей популяции.

The specificity rate given here for the inexpensive enzyme immunoassay screening tests indicates that, in 1,000 HIV test results of healthy individuals, about 15 of these results will be a false positive. Confirming the test result (i. e., by repeating the test, if this option is available) could reduce the ultimate likelihood of a false positive to about 1 result in 250,000 tests given. The sensitivity rating, likewise, indicates that, in 1,000 test results of HIV infected people, 3 will actually be a false negative result. However, based upon the HIV prevalence rates at most testing centers within the United States, the negative predictive value of these tests is extremely high, meaning that a negative test result will be correct more than 9,997 times in 10,000 (99.97% of the time). The very high negative predictive value of these tests is why the CDC recommends that a negative test result be considered conclusive evidence that an individual does not have HIV. Of course, the actual numbers vary depending on the testing population. This is because interpreting of the results of any medical test (assuming no test is 100% accurate) depends upon the initial degree of belief, or the prior probability that an individual has, or does not have a disease. Generally the prior probability is estimated using the prevalence of a disease within a population or at a given testing location. The positive predictive value and negative predictive value of all tests, including HIV tests, take into account the prior probability of having a disease along with the accuracy of the testing method to determine a new degree of belief that an individual has or does not have a disease (also known as the posterior probability). The chance that a positive test accurately indicates an HIV infection increases as the prevalence or rate of HIV infection increases in the population. Conversely, the negative predictive value will decrease as the HIV prevalence rises. Thus a positive test in a high risk population, such as people who frequently engage in unprotected anal intercourse with unknown partners, is more likely to correctly represent HIV infection than a positive test in a very low risk population, such as unpaid blood donors. Many studies have confirmed the accuracy of current methods of HIV testing in the United States, reporting false positive rates of 0.0004 to 0.0007 and false negative rates of 0.003 in the general population.

Антигенные анализы

Анализ на антиген p24 выявляет наличие белка p24 ВИЧ (также известного как CA), капсидного белка вируса. Моноклональные антитела, специфичные к белку p24, смешиваются с кровью пациента. Любой белок p24, присутствующий в крови пациента, связывается с моноклональным антителом, а фермент-меченный антителом к моноклональным антителам к p24 вызывает изменение цвета, если p24 был обнаружен в образце. В скрининге донорской крови в США и ЕС этот тест больше не используется регулярно, поскольку целью было снижение риска ложноотрицательных результатов в период окна. Тестирование на нуклеиновые кислоты (НАТ) более эффективно для этой цели, и анализ на антиген p24 не рекомендуется при проведении НАТ. В общей диагностике тесты на антиген p24 используются для раннего выявления ВИЧ, поскольку уровень антигена p24 повышается вскоре после заражения по сравнению с антителами, и тест часто применяется в сочетании с тестом на антитела для эффективного охвата более длительного периода окна. Он менее эффективен в качестве самостоятельного теста из-за низкой чувствительности и работоспособности только в ранний период после заражения. Уровень антигена p24 снижается по мере увеличения выработки антител к белку p24 организмом, что затрудняет его обнаружение на более поздних стадиях.

Комбинационные тесты на антиген/антитела

Комбинированный анализ, или тест 4-го поколения, разработан для одновременного выявления антигена p24 и антител к ВИЧ в одном образце. Комбинированные тесты способны обнаружить ВИЧ уже через 2–6 недель после инфицирования и рекомендуются для использования в лабораторной диагностике.

Испытания на основе нуклеиновой кислоты (NAT)

Тесты на основе нуклеиновых кислот амплифицируют и обнаруживают одну или несколько целевых последовательностей, расположенных в специфических генах ВИЧ, таких как ВИЧ I GAG, ВИЧ II GAG, ВИЧ env или ВИЧ pol. Поскольку эти тесты относительно дороги, кровь сначала подвергается скринингу путем объединения примерно 8–24 образцов и тестирования их совместно; если пул показывает положительный результат, каждый образец повторно тестируется индивидуально. Хотя это значительно снижает стоимость, разбавление вируса в объединенных образцах уменьшает эффективную чувствительность теста, увеличивая окно обнаружения на четыре дня (при условии 20-кратного разбавления, приблизительного 20-часового времени удвоения вируса, предела обнаружения в 50 копий/мл, что приводит к пределу обнаружения в 1000 копий/мл). С 2001 года донорская кровь в Соединенных Штатах скринируется с использованием тестов на основе нуклеиновых кислот, что сокращает окно между инфицированием и обнаруживаемостью заболевания до медианы в 17 дней (95% ДИ, 13–28 дней, предполагает объединение образцов). Другая версия этого теста предназначена для использования в сочетании с клинической картиной и другими лабораторными маркерами прогрессирования заболевания для ведения пациентов, инфицированных ВИЧ-1. В тесте RT-ПЦР вирусная РНК извлекается из плазмы пациента и обрабатывается обратной транскриптазой (RT) для преобразования вирусной РНК в кДНК. Затем применяется процесс полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием двух праймеров, уникальных для генома вируса. После завершения амплификации ПЦР полученные продукты ДНК гибридизуются со специфическими олигонуклеотидами, связанными со стенкой сосуда, и затем визуализируются с помощью зонда, связанного с ферментом. Количество вируса в образце может быть количественно определено с достаточной точностью для обнаружения трехкратных изменений. В тесте Quantiplex bDNA или тесте с разветвленной ДНК плазму помещают в центрифугу для концентрирования вируса, который затем раскрывают для высвобождения его РНК. Добавляются специальные олигонуклеотиды, которые связываются с вирусной РНК и с определенными олигонуклеотидами, связанными со стенкой сосуда. Таким образом, вирусная РНК фиксируется на стенке. Затем добавляются новые олигонуклеотиды, которые связываются в нескольких местах с этой РНК, и другие олигонуклеотиды, которые связываются в нескольких местах с этими олигонуклеотидами. Это делается для усиления сигнала. Наконец, добавляются олигонуклеотиды, которые связываются с последним набором олигонуклеотидов и связаны с ферментом; действие фермента вызывает цветную реакцию, которая позволяет количественно определить вирусную РНК в исходном образце. Мониторинг эффективности антиретровирусной терапии путем серийных измерений РНК ВИЧ-1 в плазме с помощью этого теста был подтвержден для пациентов с вирусной нагрузкой более 25 000 копий на миллилитр.

Nucleic acid based tests amplify and detect one or more of several target sequences located in specific HIV genes, such as HIV I GAG, HIV II GAG, HIV env, or the HIV pol. Since these tests are relatively expensive, the blood is screened by first pooling some 8–24 samples and testing these together; if the pool tests positive, each sample is retested individually. Although this results in a dramatic decrease in cost, the dilution of the virus in the pooled samples decreases the effective sensitivity of the test, lengthening the window period by four days (assuming a 20 fold dilution, ~20hr virus doubling time, detection limit 50 copies/ml, making limit of detection 1,000 copies/ml). Since 2001, donated blood in the United States has been screened with nucleic acid based tests, shortening the window period between infection and detectability of disease to a median of 17 days (95% CI, 13–28 Days, assumes pooling of samples). A different version of this test is intended for use in conjunction with clinical presentation and other laboratory markers of disease progress for the management of HIV 1 infected patients. In the RT PCR test, viral RNA is extracted from the patient's plasma and is treated with reverse transcriptase (RT) to convert the viral RNA into cDNA. The polymerase chain reaction (PCR) process is then applied, using two primers unique to the virus's genome. After PCR amplification is complete, the resulting DNA products are hybridized to specific oligonucleotides bound to the vessel wall, and are then made visible with a probe bound to an enzyme. The amount of virus in the sample can be quantified with sufficient accuracy to detect threefold changes. In the Quantiplex bDNA or branched DNA test, plasma is placed in a centrifuge to concentrate the virus, which is then opened to release its RNA. Special oligonucleotides that bind to viral RNA and to certain oligonucleotides bound to the wall of the vessel are added. In this way, viral RNA is fastened to the wall. Then new oligonucleotides that bind at several locations to this RNA are added, and other oligonucleotides that bind at several locations to those oligonucleotides. This is done to amplify the signal. Finally, oligonucleotides that bind to the last set of oligonucleotides and that are bound to an enzyme are added; the enzyme action causes a color reaction, which allows quantification of the viral RNA in the original sample. Monitoring the effects of antiretroviral therapy by serial measurements of plasma HIV 1 RNA with this test has been validated for patients with viral loads greater than 25,000 copies per milliliter.

Проверка

Правительство Южной Африки объявило о планах начать тестирование на ВИЧ в средних школах к марту 2011 года. Этот план был отменен из-за опасений по поводу нарушения конфиденциальности учащихся, поскольку школы, как правило, не располагают средствами для безопасного хранения такой информации, и обычно не имеют возможности предоставлять консультации учащимся, получившим положительный результат теста на ВИЧ. В Южной Африке любой человек старше 12 лет может попросить пройти тестирование на ВИЧ без ведома или согласия родителей. До прекращения действия программы в рамках нее было протестировано около 80 000 учащихся в трех провинциях.

Другие тесты, используемые при лечении ВИЧ

Количество CD4 Т-клеток не является тестом на ВИЧ, а процедурой определения числа CD4 Т-клеток в крови. Анализ на CD4 не определяет наличие ВИЧ. Он используется для мониторинга функции иммунной системы у ВИЧ-инфицированных людей. Снижение количества CD4 Т-клеток считается маркером прогрессирования ВИЧ-инфекции. Нормальный уровень CD4 может колебаться от 500 клеток/мм³ до 1000 клеток/мм³. У ВИЧ-положительных людей СПИД официально диагностируется при снижении уровня клеток ниже 200 клеток/мкл или при возникновении определенных оппортунистических инфекций. Использование уровня CD4 в качестве критерия диагностики СПИДа было введено в 1992 году; значение 200 было выбрано, поскольку оно соответствовало значительно повышенному риску оппортунистических инфекций. Низкий уровень CD4 у людей с СПИДом указывает на необходимость начала профилактики определенных типов оппортунистических инфекций. Низкий уровень CD4 Т-клеток связан с различными состояниями, включая многие вирусные, бактериальные и паразитарные инфекции, первичный иммунодефицит, кокцидиоидомикоз, ожоги, травмы, внутривенное введение чужеродных белков, недоедание, чрезмерные физические нагрузки, беременность, естественные суточные колебания, психологический стресс и социальную изоляцию. Этот анализ также иногда используется для оценки функции иммунной системы у людей, у которых функция CD4 Т-клеток нарушена по причинам, отличным от ВИЧ-инфекции, таким как некоторые заболевания крови, генетические расстройства и побочные эффекты химиотерапевтических препаратов. В целом, чем ниже число Т-клеток, тем слабее функция иммунной системы. Нормальный уровень CD4 составляет от 500 до 1500 CD4+ Т-клеток/мкл, и эти показатели могут колебаться у здоровых людей в зависимости от перенесенных инфекций, питания, физической активности и других факторов. У женщин этот показатель, как правило, несколько ниже, чем у мужчин.

Устные испытания

В результате увеличения числа ложноположительных результатов при быстром оральном тестировании на ВИЧ в 2005 году, Департамент здравоохранения и психической гигиены Нью-Йорка добавил возможность тестирования цельной крови из пальца после любого реактивного результата, перед проведением вестерн-блота для подтверждения положительного результата. После дальнейшего увеличения числа ложноположительных результатов в клиниках Департамента здравоохранения Нью-Йорка в конце 2007 года и начале 2008 года, эти клиники отказались от дальнейших оральных скринингов и вернулись к тестированию с использованием цельной крови из пальца. Несмотря на увеличение числа ложноположительных результатов в Департаменте здравоохранения Нью-Йорка, Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) продолжают поддерживать использование неинвазивных образцов жидкости изо рта из-за их популярности в медицинских учреждениях и удобства применения. Директор программы контроля ВИЧ в области общественного здравоохранения округа Кинг (Сиэтл) сообщил, что OraQuick не выявил как минимум 8% из 133 человек, у которых инфекция была подтверждена сопоставимым диагностическим тестом. Были внедрены стратегии для определения контроля качества и частоты ложноположительных результатов. Необходимо понимать, что любой реактивный результат теста OraQuick является предварительным и всегда требует подтверждающего теста, независимо от метода тестирования (цельная кровь, полученная из вены, цельная кровь из пальца или жидкость, просочившаяся через слизистую оболочку полости рта). Ряд других центров тестирования, не столкнувшихся с ростом числа ложноположительных результатов, продолжают использовать тест OraQuick HIV Anti body Testing от OraSure.

Отрицание СПИДа

Тесты на ВИЧ критикуются сторонниками теории об отрицании СПИДа (маргинальная группа, члены которой полагают, что ВИЧ либо не существует, либо безвреден). Точность серологического тестирования подтверждена выделением и культивированием ВИЧ, а также обнаружением РНК ВИЧ методом ПЦР, которые общепризнанны как "золотые стандарты" в микробиологии.

Мошеннические испытания

Было зафиксировано несколько случаев продажи мошеннических тестов по почте или через интернет широкой публике. В 1997 году житель Калифорнии был обвинен в мошенничестве при переписке и проводе с целью обмана за продажу якобы домашних наборов для тестирования. В 2004 году Федеральная торговая комиссия США обратилась к Federal Express и Таможенной службе США с просьбой конфисковать партии домашних наборов для тестирования на ВИЧ Discreet, произведенных Грегори Стивеном Вонгом из Ванкувера, Канада. В феврале 2005 года Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) выпустило предупреждение против использования экспресс-тестов на ВИЧ и других наборов для домашнего использования, распространяемых компанией Globus Media из Монреаля, Канада.