Ристоцетин: от антибиотика к диагностике нарушений свертываемости крови.

Введение

Ристоцетин – это гликопептидный антибиотик, полученный из Amycolatopsis lurida, который ранее использовался для лечения стафилококковых инфекций. В настоящее время он не применяется в клинической практике из-за вызываемой им тромбоцитопении и агглютинации тромбоцитов. Сейчас он используется исключительно для оценки этих функций in vitro при диагностике таких состояний, как болезнь фон Виллебранда (vWD) и синдром Бернарда-Сулье. Агглютинация тромбоцитов, вызванная ристоцетином, может происходить только в присутствии мультимеров фактора фон Виллебранда, поэтому, если ристоцетин добавляют к крови, не содержащей этот фактор (или его рецептор – см. ниже), тромбоциты не слипаются. По неизвестному механизму антибиотик ристоцетин вызывает связывание фактора фон Виллебранда с рецептором тромбоцитов – гликопротеином Ib (GpIb), поэтому при добавлении ристоцетина в нормальную кровь происходит агглютинация. При некоторых типах болезни фон Виллебранда (типы 2B и тромбоцитарный тип) даже очень небольшие количества ристоцетина вызывают агрегацию тромбоцитов при использовании плазмы пациента, богатой тромбоцитами. Этот парадокс объясняется наличием у этих типов мутаций, приводящих к более прочному связыванию мультимеров фактора фон Виллебранда с высокой молекулярной массой с их рецепторами на тромбоцитах (альфа-цепочками рецепторов гликопротеина Ib (GPIb)). В случае болезни фон Виллебранда типа 2B мутация затрагивает фактор фон Виллебранда (ген VWF), а при тромбоцитарном типе болезни фон Виллебранда мутация происходит в рецепторе (GPIb). Это усиленное связывание вызывает болезнь фон Виллебранда, поскольку мультимеры с высокой молекулярной массой удаляются из циркуляции в плазме, оставаясь прикрепленными к тромбоцитам пациента. Таким образом, если используется плазма пациента с низким содержанием тромбоцитов, анализ с кофактором ристоцетина не вызовет агглютинацию стандартизированных тромбоцитов (то есть, объединенных тромбоцитов от нормальных доноров, фиксированных в формалине), подобно другим типам болезни фон Виллебранда. Во всех вариантах анализа с ристоцетином тромбоциты фиксируют в формалине перед проведением анализа, чтобы предотвратить высвобождение фактора фон Виллебранда, хранящегося в гранулах тромбоцитов, и его участие в агрегации тромбоцитов. Следовательно, активность кофактора ристоцетина зависит исключительно от мультимеров фактора с высокой молекулярной массой, присутствующих в циркулирующей плазме.

Ristocetin is a glycopeptide antibiotic, obtained from Amycolatopsis lurida, previously used to treat staphylococcal infections. It is no longer used clinically because it caused thrombocytopenia and platelet agglutination. It is now used solely to assay those functions in vitro in the diagnosis of conditions such as von Willebrand disease (vWD) and Bernard–Soulier syndrome. Platelet agglutination caused by ristocetin can occur only in the presence of von Willebrand factor multimers, so if ristocetin is added to blood lacking the factor (or its receptor—see below), the platelets will not clump. Through an unknown mechanism, the antibiotic ristocetin causes von Willebrand factor to bind the platelet receptor glycoprotein Ib (GpIb), so when ristocetin is added to normal blood, it causes agglutination. In some types of vWD (types 2B and platelet type), even very small amounts of ristocetin cause platelet aggregation when the patient's platelet rich plasma is used. This paradox is explained by these types having gain of function mutations which cause the vWD high molecular weight multimers to bind more tightly to their receptors on platelets (the alpha chains of glycoprotein Ib (GPIb) receptors). In the case of type 2B vWD, the gain of function mutation involves von Willebrand's factor (VWF gene), and in platelet type vWD, the receptor is the object of the mutation (GPIb). This increased binding causes vWD because the high molecular weight multimers are removed from circulation in plasma since they remain attached to the patient's platelets. Thus, if the patient's platelet poor plasma is used, the ristocetin cofactor assay will not agglutinate standardized platelets (i. e., pooled platelets from normal donors that are fixed in formalin), similar to the other types of vWD. In all forms of the ristocetin assay, the platelets are fixed in formalin prior to the assay to prevent von Willebrand's factor stored in platelet granules from being released and participating in platelet aggregation. Thus, the ristocetin cofactor activity depends only upon high molecular multimers of the factor present in circulating plasma.